鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)氨基糖苷類藥物雙圈耐藥現(xiàn)象的研究.pdf

1、鮑曼不動(dòng)桿菌是導(dǎo)致醫(yī)院內(nèi)感染的一種重要的條件致病菌,尤其是在重癥監(jiān)護(hù)病房(ICU)的病人中。引起院內(nèi)感染的病原菌多數(shù)為耐藥菌,對(duì)包括β-內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類及喹諾酮類在內(nèi)的多種抗生素均耐藥,因此給臨床治療造成極大的困難。
　　 氨基糖苷類抗生素臨床應(yīng)用廣泛,尤其是在治療革蘭陰性菌引起的危重感染時(shí)。該抗生素通過(guò)與原核生物30S核糖體亞基16S rRNA高度保守的A位點(diǎn)結(jié)合而阻礙蛋白質(zhì)的合成,繼而導(dǎo)致細(xì)菌死亡。耐該類抗生素的機(jī)制主要

2、包括產(chǎn)氨基糖苷修飾酶、作用靶位改變、膜通透性降低和外排系統(tǒng)導(dǎo)致的細(xì)胞內(nèi)藥物濃度降低等多種因素。
　　 本文旨在探討在K-B法藥物敏感試驗(yàn)中對(duì)氨基糖苷類抗菌藥物雙圈耐藥的鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥基因攜帶狀況、藥物誘導(dǎo)對(duì)耐藥基因mRNA表達(dá)量的影響以及全自動(dòng)微生物鑒定及藥敏分析儀VITEK2 Compact檢測(cè)鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)阿米卡星藥物敏感試驗(yàn)的準(zhǔn)確性及造成檢測(cè)誤差的原因。我們用PCR擴(kuò)增法對(duì)編碼整合子酶的基因和整合子可變區(qū)進(jìn)行擴(kuò)增,并聯(lián)合

3、RFLP和DNA測(cè)序技術(shù)分析可變區(qū)耐藥基因。同時(shí)對(duì)4種常見(jiàn)的氨基糖苷修飾酶基因及3種16S rRNA甲基化酶基因armA,rmtB及rmtC進(jìn)行擴(kuò)增,對(duì)擴(kuò)增結(jié)果為陽(yáng)性的基因利用RT-PCR的方法分析阿米卡星誘導(dǎo)前后耐藥基因表達(dá)量。結(jié)果發(fā)現(xiàn):85.7％(48/56)的雙圈耐藥菌株檢測(cè)到Ⅰ類整合子,RFLP分型和DNA測(cè)序結(jié)果表明,整合子可變區(qū)攜帶的基因盒為aacA4-catB-aadA1,aacC1-orfX-aadA1及dfrA17-a

4、adA5。36株檢測(cè)出aacA4,10株檢測(cè)出aacC1,5株檢測(cè)出aacC2,所有菌株均未檢測(cè)出aphA6,其中2株同時(shí)檢出aacA4和aacC2。所有雙圈耐藥菌株均檢測(cè)到armA基因,未檢測(cè)到rmtB及rmtC,敏感菌株和普通耐藥菌檢測(cè)3種甲基化酶基因均為陰性。RT-PCR結(jié)果顯示經(jīng)阿米卡星誘導(dǎo)后細(xì)菌armA基因tuRNA表達(dá)量顯著上升。VITEK2 Compact檢測(cè)鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)阿米卡星藥物的結(jié)果誤差主要出現(xiàn)在K-B法表型為雙圈

5、耐藥的菌株,這些菌幾乎均被誤判為敏感。
　　 由此我們得出的結(jié)論:介導(dǎo)鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)氨基糖苷類藥物雙圈耐藥的主要原因并非整合子可變區(qū)基因盒而是armA基因,該基因通過(guò)誘導(dǎo)表達(dá)產(chǎn)生的甲基化酶導(dǎo)致16S rRNA甲基化從而阻礙阿米卡星與藥物靶位結(jié)合。此外,armA基因陽(yáng)性的雙圈耐藥菌株在液體培養(yǎng)基中所產(chǎn)生的細(xì)菌濁度較低,VITEK2 Compact檢測(cè)儀進(jìn)行吸光度掃描時(shí)無(wú)法判定為細(xì)菌生長(zhǎng),誤判為細(xì)菌生長(zhǎng)被抑制,影響了臨床報(bào)告的準(zhǔn)確性