噬菌體隨機肽庫篩選肝癌患者血清腫瘤標記物的實驗研究.pdf

1、背景和目的：原發(fā)性肝癌(Primary Liver Cancer，PLC)早期不易被發(fā)現(xiàn)，然而腫瘤可以刺激機體產(chǎn)生相應(yīng)的腫瘤標記物，通過檢測這些新標記物可以發(fā)現(xiàn)和診斷PLC。用分子生物學和免疫學方法篩選和鑒定這些新產(chǎn)生的標記物，可能會為敏感、特異的診斷早期腫瘤提供新的思路。PLC發(fā)生后機體產(chǎn)生各種新的生物標記，目前臨床上實驗室診斷肝癌最常用的是甲胎蛋白(AFP)，但其敏感性只有大約70％，在良性肝病中血清AFP也有增高現(xiàn)象。臨床上急需尋

2、找新的特異性更高的腫瘤標記物。 噬菌體展示肽庫技術(shù)是一種用于篩選蛋白、多肽的強有力的生物技術(shù)，它的基本原理是將外源蛋白通過與噬菌體外殼蛋白融合而表達于噬菌體顆粒表面，被展示的外源蛋白可以保持相對獨立的空間結(jié)構(gòu)和生物活性。在噬菌體表面表達出各種氨基酸組合的短肽，通過與特定的靶標反應(yīng)，使展示特定蛋白的噬菌體從表達有各種外源性蛋白的噬菌體肽庫中篩選出來，然后進行序列測定，獲得相應(yīng)的結(jié)構(gòu)和功能信息。我們運用噬菌體隨機肽庫篩選PLC患者的

3、血清，獲得特異性多肽，期望為PLC的診斷和判斷預后提供新的標記物。 方法：1.先通過將噬菌體與正常血清預吸附，然后未結(jié)合的噬菌體再與肝癌血清進行吸附，得到與肝癌患者血清結(jié)合的噬菌體擴增后，重復篩選三次，獲得特異性噬菌體。2.挑取單個噬菌斑，通過ELISA方法檢測與血清的結(jié)合情況，最終得到能夠與肝癌血清特異性結(jié)合的單個噬菌體克隆。3.提取單個噬菌體克隆通過引物-96III測序，并根據(jù)短肽插入位點和氨基酸遺傳密碼表得到插入短肽序列。