噬菌體隨機(jī)肽庫(kù)篩選肝癌患者血清腫瘤標(biāo)記物的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景和目的：原發(fā)性肝癌(Primary Liver Cancer，PLC)早期不易被發(fā)現(xiàn)，然而腫瘤可以刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的腫瘤標(biāo)記物，通過(guò)檢測(cè)這些新標(biāo)記物可以發(fā)現(xiàn)和診斷PLC。用分子生物學(xué)和免疫學(xué)方法篩選和鑒定這些新產(chǎn)生的標(biāo)記物，可能會(huì)為敏感、特異的診斷早期腫瘤提供新的思路。PLC發(fā)生后機(jī)體產(chǎn)生各種新的生物標(biāo)記，目前臨床上實(shí)驗(yàn)室診斷肝癌最常用的是甲胎蛋白(AFP)，但其敏感性只有大約70％，在良性肝病中血清AFP也有增高現(xiàn)象。臨床上急需尋

2、找新的特異性更高的腫瘤標(biāo)記物。 噬菌體展示肽庫(kù)技術(shù)是一種用于篩選蛋白、多肽的強(qiáng)有力的生物技術(shù)，它的基本原理是將外源蛋白通過(guò)與噬菌體外殼蛋白融合而表達(dá)于噬菌體顆粒表面，被展示的外源蛋白可以保持相對(duì)獨(dú)立的空間結(jié)構(gòu)和生物活性。在噬菌體表面表達(dá)出各種氨基酸組合的短肽，通過(guò)與特定的靶標(biāo)反應(yīng)，使展示特定蛋白的噬菌體從表達(dá)有各種外源性蛋白的噬菌體肽庫(kù)中篩選出來(lái)，然后進(jìn)行序列測(cè)定，獲得相應(yīng)的結(jié)構(gòu)和功能信息。我們運(yùn)用噬菌體隨機(jī)肽庫(kù)篩選PLC患者的

3、血清，獲得特異性多肽，期望為PLC的診斷和判斷預(yù)后提供新的標(biāo)記物。 方法：1.先通過(guò)將噬菌體與正常血清預(yù)吸附，然后未結(jié)合的噬菌體再與肝癌血清進(jìn)行吸附，得到與肝癌患者血清結(jié)合的噬菌體擴(kuò)增后，重復(fù)篩選三次，獲得特異性噬菌體。2.挑取單個(gè)噬菌斑，通過(guò)ELISA方法檢測(cè)與血清的結(jié)合情況，最終得到能夠與肝癌血清特異性結(jié)合的單個(gè)噬菌體克隆。3.提取單個(gè)噬菌體克隆通過(guò)引物-96III測(cè)序，并根據(jù)短肽插入位點(diǎn)和氨基酸遺傳密碼表得到插入短肽序列。