小分子熱休克蛋白20在老齡大鼠心肌缺血-再灌注損傷中的作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：現(xiàn)有研究表明小分子量熱休克蛋白20(sHSP20)具有抑制血小板聚集、穩(wěn)定細(xì)胞骨架、抑制細(xì)胞凋亡等作用。然而，迄今為止尚無(wú)針對(duì)老齡心肌sHSP20表達(dá)特點(diǎn)及其對(duì)老化心臟作用的研究。缺血/再灌注損傷(MIRI)是影響冠心病患者預(yù)后的重要原因之一，而老年人MIRI發(fā)生率明顯高于普通人群，加之老齡心肌在形態(tài)結(jié)構(gòu)及功能等方面均有不同于非老齡心肌的特點(diǎn)，本研究擬采用老齡大鼠心臟制備MIRI模型，通過(guò)分子生物學(xué)、免疫熒光技術(shù)探討sHSP20在

2、老齡心肌MIRI中的作用及可能的機(jī)制，由此對(duì)防治老齡心肌MIRI提供新思路和新途徑。 材料與方法： (1)實(shí)驗(yàn)對(duì)象：以幼年(3月齡)、成年(9月齡)及老齡(24月齡)Wistar雄性大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，各年齡組再隨機(jī)分為兩組：假手術(shù)組(Control)：開(kāi)胸持續(xù)灌流160分鐘；MIRI組：開(kāi)胸后結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支40分鐘，松開(kāi)結(jié)扎線再灌120分鐘。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，取左室缺血的前壁心肌組織，立即放入液氮5分鐘，然后存入-80℃冰箱

3、備檢。 (2)實(shí)驗(yàn)方法：利用半定量RT-PCR技術(shù)觀察不同月齡大鼠實(shí)驗(yàn)前后sHSP20 mRNA的變化規(guī)律；利用Western Blot技術(shù)觀察不同月齡大鼠實(shí)驗(yàn)前后sHSP20的變化規(guī)律；利用免疫熒光技術(shù)觀察不同月齡大鼠MIRI后sHSP20分布的變化。 結(jié)果： (1)三個(gè)實(shí)驗(yàn)組在MIRI前各項(xiàng)血?dú)庵笜?biāo)、血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)無(wú)明顯差異。24月齡大鼠結(jié)扎LAD40min后PO2、SaO2、+dp/dtmax、-dp/dt

4、max、LVSP、LVEDP和HR較其它組明顯降低；再灌120min后PaCO2、HCO3-、+dp/dtmax、LVSP及HR較前兩組也明顯降低。 (2)24月齡大鼠sHSP20 mRNA的基礎(chǔ)表達(dá)量與其它月齡大鼠相比未見(jiàn)明顯差異，MIRI之后三組mRNA均有明顯的升高，但實(shí)驗(yàn)組間無(wú)明顯差異性。 (3)24月齡大鼠sHSP20的基礎(chǔ)表達(dá)量較其它月齡大鼠相比明顯減少；MIRI后24月齡大鼠sHSP20合成量也降低。同時(shí)M

5、IRI之后三組sHSP20均向細(xì)胞核內(nèi)移位，而24月齡大鼠向核內(nèi)移位較其它兩組明顯升高。 (4)免疫熒光結(jié)果顯示三組大鼠sHSP20在MIRI后均向Z線和I帶移位，但24月齡大鼠移位的能力較3月和9月齡大鼠明顯減弱。 結(jié)論： (1)老齡大鼠心肌具有正常的sHSP20 mRNA轉(zhuǎn)錄能力，MIRI后sHSP20mRNA有明顯升高，表明老齡大鼠并未喪失應(yīng)激狀態(tài)下sHSP20轉(zhuǎn)錄的能力。 (2)老齡大鼠心肌在正常