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文檔簡介
1、背景:
流感可引起季節(jié)性流行和大流行,嚴重危害人民健康。目前抗流感病毒西藥因毒副作用較大或耐藥性的增加,限制了其應用。祖國傳統(tǒng)中醫(yī)藥在預防與治療流感的臨床和基礎理論方面的研究,受到國內(nèi)外的廣泛關注,尋找新的抗流感中藥及探索其作用機制,有助于將中藥推向世界和造福人類。
目的:
探討連翹提取物(連翹苷、連翹醇提液、連翹水煎劑)對甲型流感病毒核蛋白基因體外干預的影響,為連翹抗流感病毒提供科學的理論依據(jù)。
2、 方法:
1.實驗分組: HeLa細胞組(HeLa細胞)、空質(zhì)粒組(空質(zhì)粒和HeLa細胞)、脂質(zhì)體組(HeLa細胞和脂質(zhì)體)、重組質(zhì)粒組(重組質(zhì)?;蜣D(zhuǎn)染HeLa細胞)、連翹苷組(連翹苷加入重組質(zhì)粒組中)、連翹水煎劑組(連翹水煎劑加入重組質(zhì)粒組中)、連翹醇提液組(連翹醇提液加入重組質(zhì)粒組中)七組。
2.細胞病變法確定連翹提取物最大無毒界限及實驗用濃度。
3.脂質(zhì)體瞬時轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染HeLa細胞,并以其作為實驗用
3、靶細胞。
4.膠體金免疫層析試紙法檢測各實驗組細胞培養(yǎng)上清和細胞內(nèi)核蛋白的表達。
5.提取膠體金檢測陰性組及重組質(zhì)粒組細胞總RNA,合成eDNA。
6.熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測重組質(zhì)粒組及膠體金檢測陰性組的核蛋白基因拷貝數(shù),用統(tǒng)計學軟件進行分析。
結(jié)果:
1.重組質(zhì)粒組細胞培養(yǎng)上清及細胞內(nèi)膠體金法檢測均為陽性;連翹醇提液組、連翹水煎劑組兩組細胞培養(yǎng)上清為弱陽性,醇提液組更弱些;連翹苷組、
4、連翹醇提液組、連翹水煎劑組三組細胞內(nèi)為弱陽性,連翹苷組最弱,連翹醇提液組次之;細胞對照組、脂質(zhì)體組、空質(zhì)粒組和連翹苷組四組細胞培養(yǎng)上清及細胞對照組、脂質(zhì)體組、空質(zhì)粒組三組細胞內(nèi)均為陰性。
2.連翹苷組胞內(nèi)核蛋白基因表達量為(2.07±0.2)×105copies·μl-1,重組質(zhì)粒組胞內(nèi)核蛋白基因表達量為(61.2±13)×105copies·μl-1,連翹苷組胞內(nèi)核蛋白基因表達量低于重組質(zhì)粒組胞內(nèi),差異有統(tǒng)計學意義(t=9.
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