下呼吸道常見致病菌檢測(cè)的基因芯片的研究.pdf

1、下呼吸道感染是臨床上最常見的疾病之一，嚴(yán)重威脅人類的健康。因此，若想有效控制下呼吸道感染疾病的發(fā)生，快速而準(zhǔn)確地檢測(cè)下呼吸道中致病菌是關(guān)鍵的技術(shù)基礎(chǔ)之一。傳統(tǒng)的細(xì)菌培養(yǎng)方法及生化鑒定，操作繁瑣，且需要數(shù)天才能得到結(jié)果。免疫學(xué)方法和探針雜交技術(shù)也存在特異性或敏感性的問(wèn)題。常規(guī)PCR一次只能檢出有限的幾種致病菌，對(duì)下呼吸道中分離的未知菌，或有多種細(xì)菌污染的樣品則顯得無(wú)從下手。
　　 為了實(shí)現(xiàn)對(duì)下呼吸道致病菌的快速檢測(cè)與鑒定，預(yù)防下呼

2、吸道感染疾病的發(fā)生，我們運(yùn)用寡核苷酸芯片技術(shù)建立了對(duì)常見的八種下呼吸道致病菌進(jìn)行檢測(cè)的方法，檢測(cè)的目的菌株是銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、嗜肺軍團(tuán)菌、流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、卡他莫拉菌。我們利用在細(xì)菌分類學(xué)上具有重要意義的16S rRNA和16S-23S rRNA間區(qū)，以及一些已被驗(yàn)證過(guò)較為成熟的特異基因作為檢測(cè)靶基因，并在其間設(shè)計(jì)探針，建立一套下呼吸道致病菌的基因芯片快速檢測(cè)技術(shù)。不同細(xì)菌的16S rRN

3、A具有序列一致的恒定區(qū)和序列不同的可變區(qū)，恒定區(qū)和可變區(qū)交錯(cuò)排列。這樣，我們?cè)诤愣▍^(qū)設(shè)計(jì)PCR引物，在可變區(qū)設(shè)計(jì)檢測(cè)探針；而特異基因作為靶基因時(shí)，我們選擇其種內(nèi)保守性與種內(nèi)特異性最高的區(qū)域進(jìn)行引物和探針設(shè)計(jì)，用多對(duì)引物(共分兩組)在同一反應(yīng)條件中，可以將全部待檢致病菌的相應(yīng)基因片段擴(kuò)增出來(lái)，再用每種細(xì)菌的特異性探針陣列與標(biāo)記的靶片段進(jìn)行雜交反應(yīng)，雜交后用專用設(shè)備讀取分析熒光信號(hào)，可以定性和半定量地檢出致病菌。通過(guò)雜交結(jié)果可以看出設(shè)計(jì)的探