豬偽狂犬病病毒和三種主要致病菌的基因芯片檢測(cè)技術(shù)研究.pdf

1、隨著分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)展,許多分子生物學(xué)方法在動(dòng)物疾病的診斷中得到了應(yīng)用?；蛐酒夹g(shù)作為一項(xiàng)高新技術(shù),在面積不大的載體上如玻片上可實(shí)現(xiàn)對(duì)多種目的基因的同時(shí)檢測(cè)。它是基于PCR技術(shù)和核酸雜交的原理,事先對(duì)載體表面進(jìn)行特定處理,將寡核苷酸片段或cDNA片段有序地、高密度地排列于固相載體上,形成DNA微陣列,用高精密度的激光共聚焦熒光檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行雜交信號(hào)的檢測(cè)。其優(yōu)點(diǎn)為高通量、并行性、微型化、自動(dòng)化、準(zhǔn)確快速、多功能及防止污染從而有效排除外界

2、干擾。目前國內(nèi)外有許多學(xué)者都在從事基因芯片的研究工作,基因芯片技術(shù)無疑為動(dòng)物疾病診斷和微生物檢測(cè)提供了一項(xiàng)有效快速的檢測(cè)技術(shù)。本試驗(yàn)嘗試性地制備了用于檢測(cè)豬偽狂犬病病毒和三種主要致病菌的基因芯片。
　　 偽狂犬病病毒(PRV)是引起豬繁殖障礙的主要病原體之一,這種疾病給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失,常規(guī)的病因?qū)W實(shí)驗(yàn)室診斷方法大多耗時(shí)長(zhǎng)、敏感性低和需要較復(fù)雜的操作技術(shù)。本研究在分析豬偽狂犬病毒基因組結(jié)構(gòu)特征的基礎(chǔ)上,研究了PRV檢測(cè)

3、基因芯片靶基因和用于檢測(cè)PRV的探針、芯片的雜交溫度和時(shí)間等；將gE基因作為目的基因,并根據(jù)其基因設(shè)計(jì)引物與探針,采用不對(duì)稱PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因,將探針固定在表面經(jīng)過醛基化處理過的芯片上來檢測(cè)豬偽狂犬病病毒,構(gòu)建了PRV病原檢測(cè)基因芯片,達(dá)到了對(duì)豬偽狂犬病病毒檢測(cè)的目的。
　　 臨床上常用的病原微生物診斷方法有培養(yǎng)技術(shù)、免疫學(xué)技術(shù)和PCR技術(shù)等。這些技術(shù)在臨床診斷中發(fā)揮了巨大的作用,但仍存在一些缺點(diǎn)。如培養(yǎng)技術(shù)繁瑣而費(fèi)時(shí),免疫

4、技術(shù)要有特異的血清等；快速檢測(cè)致病菌能夠及時(shí)有效地預(yù)防、治療和控制致病菌的傳染。為了探索一種準(zhǔn)確快速的檢測(cè)方法,本試驗(yàn)嘗試將基因芯片技術(shù)應(yīng)用到致病菌檢測(cè)領(lǐng)域,利用原核生物16SrRNA基因保守性兼變異性的特點(diǎn),設(shè)計(jì)篩選了1對(duì)通用引物,在其保守區(qū)設(shè)計(jì)通用引物,在其變異區(qū)設(shè)計(jì)探針,實(shí)現(xiàn)多病原菌的檢測(cè),真正的實(shí)現(xiàn)高通量檢測(cè),在相同的條件下對(duì)沙門氏菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌進(jìn)行檢測(cè),達(dá)到了對(duì)細(xì)菌進(jìn)行檢測(cè)鑒定的目的,制備的基因芯片能夠同時(shí)檢測(cè)沙