常見(jiàn)致病菌通用芯片檢測(cè)方法的研究.pdf

1、目的:利用生物芯片進(jìn)行細(xì)菌的高通量檢測(cè)和鑒定已成為很多人的共識(shí),但至今為之還未真正實(shí)現(xiàn).為建立細(xì)菌性生物恐怖劑和重要醫(yī)學(xué)細(xì)菌的篩查方法,該研究旨在建立一種基于16S rDNA寡核苷酸芯片的檢測(cè)和鑒定常見(jiàn)致病菌的技術(shù).方法:以16S rDNA為靶標(biāo),針對(duì)待檢細(xì)菌設(shè)計(jì)合成一系列寡核苷酸探針,制備寡核苷酸芯片.由于16S rDNA的保守性,針對(duì)每個(gè)細(xì)菌的四個(gè)可變區(qū)設(shè)計(jì)出4條探針.對(duì)該室保存的包括近緣和遠(yuǎn)緣細(xì)菌在內(nèi)的135種共計(jì)300多株細(xì)菌對(duì)

2、探針進(jìn)行了驗(yàn)證和篩選.根據(jù)一種含26條種特異性探針的試驗(yàn)芯片,對(duì)芯片的雜交和洗滌條件等進(jìn)行了摸索,并確立了新的數(shù)據(jù)分析方法.以篩選得到的探針,重新制備新的寡核苷酸芯片.待檢細(xì)菌DNA經(jīng)通用引物擴(kuò)增標(biāo)記后,與芯片雜交,對(duì)雜交圖譜分析歸納,得到一套種/屬特異的檢測(cè)模式.待檢樣本與芯片雜交后,結(jié)果與種/屬特異的檢測(cè)模式相比,根據(jù)相似性大小判斷樣本的種類.以該室保存的部分樣品對(duì)其進(jìn)行了特異性驗(yàn)證.最后進(jìn)行了混合樣品檢測(cè)試驗(yàn)及靈敏度試驗(yàn).結(jié)論:該