豬的六種常見致病菌基因芯片檢測技術的研究.pdf

1、細菌病在我國不同規(guī)模的養(yǎng)豬場常年不斷發(fā)生，特別是病毒病在豬群中流行時，細菌病往往都會出現(xiàn)，出現(xiàn)混合感染或繼發(fā)感染，致使豬群的發(fā)病率和死亡率都有很大程度提高，給我國的養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經濟損失。當前，免疫抑制性疾病在豬群中普遍存在，致病菌新的血清型不斷出現(xiàn)，抗生素濫用造成細菌耐藥性不斷提高，甚至出現(xiàn)超級細菌，而且豬場和社會的生物安全措施不健全、不到位，這些不利的情況給我國豬病的治療和防控工作帶來很大的困難。通過對規(guī)?；B(yǎng)豬場送檢的病料進行細

2、菌學分離鑒定，發(fā)現(xiàn)細菌分離的陽性率高達82％。分離的細菌主要有鏈球菌、副豬嗜血桿菌、大腸桿菌、肺炎支原體、多殺性巴氏桿菌、傳染性胸膜肺炎放線桿菌、沙門氏菌和附紅細胞體等。因此，為了我國養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展，在重視對豬的病毒性疾病防控的同時，我們一定也要加強對細菌性疾病的預防和治療，以確保豬只的健康生長，而對細菌有效的鑒定是重要前提。
　　臨床上鑒定病原菌常用的方法有分離培養(yǎng)技術、免疫學技術和PCR技術等，這些方法雖然都非常有效，但是各

3、有缺點?；蛐酒夹g的出現(xiàn)，為致病菌的鑒定開辟了新的道路，它是分子生物技術與微電子技術融合的結晶，將大量已知的核苷酸序列固定于固相載體表面，通過堿基互補配對原則與標記的靶基因雜交，再對雜交信號進行掃描分析，可快速、準確的對致病菌作出鑒定。由于其微量、快速、準確、高通量等的優(yōu)點，定會成為新一代的自動化疫病檢測工具。
　　以多殺性巴氏桿菌、豬大腸桿菌、胸膜肺炎放線桿菌、副豬嗜血桿菌、金黃色葡萄球菌、豬鏈球菌6種豬常見致病菌為目標細菌，

4、16-23S rRNA基因為靶基因，從GenBank中下載它們16S rDNA、16-23S rDNA、23S rDNA的全序列，在16-23S rDNA的變異區(qū)設計針對6種細菌的特異性探針，在16S rDNA、23S rDNA的保守區(qū)設計通用引物。通過序列分析、靶標與探針雜交試驗、雜交條件優(yōu)化試驗建立了由6條寡核苷酸探針和1對通用引物構成的豬常見致病菌基因芯片的檢測方法。用參考菌株全基因組作為模板做PCR得到靶標，通過每種靶標與相應探