醛固酮參與代謝綜合征的形成.pdf

1、目的：
　　 由于目前尚無特異有效的防治方法，胰島素抵抗（insulin resistence，IR）和代謝綜合征（metabolic syndrome，MS）的發(fā)病率一直居高不下。最近，腎素-血管緊張素系統(tǒng)（Renin-angiotensin system，RAS）引起關注，有證據(jù)提示RAS與IR/MS存在重要關聯(lián)。既往集中于血管緊張素II（angiotensin II，Ang II）的研究，但近年來醛固酮（aldostero

2、ne，ALD）備受關注，為系統(tǒng)研究ALD與IR/MS的關系，本研究的目的在于：①建立以高鹽高脂誘導的IR/MS動物模型；②以觀察IR/MS中胰腺ALD的變化規(guī)律，并通過ALD拮抗劑干預觀察動物病情和預后的改變；③在此基礎上，進一步研究ALD拮抗劑螺內酯干預IR/MS細胞凋亡通路的機制。
　　 研究內容和方法：
　　 第一部分：MS動物模型的評價36只3周齡雄性Wistar大鼠隨機分為3組(每組12只)：(Ⅰ)正常鹽組(0

3、.5％ NaCl，NS)，(Ⅱ)高鹽高脂組(49％fat+4％ NaCl,FS)，(Ⅲ)高鹽高脂+螺內酯組(螺內酯80mg/kg/day，F(xiàn)S+S)。螺內酯溶于飲用水中，在觀察12周后，測體重(WB)，頸總動脈插管直接測血壓，血漿測血脂指標（TC,TG,LDL-C,HDL-C）,測血清胰島素和血糖值，根據(jù)穩(wěn)態(tài)胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR index：fasting insulin X fasting glucose/22.5)[1]）

4、評價是否存在胰島素抵抗，根據(jù)代謝綜合征的診斷標準及統(tǒng)計學方法進行組間比較評價模型是否構建成功。
　　 第二部分：在IR/MS模型中胰腺組織的ALD變化建立以高鹽高脂誘導的IR/MS動物模型，在觀察12周后分離出胰腺組織，胰腺頭部采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）方法測定ALD濃度的變化及Western blotting檢測鹽皮質激素受體（mineralocorticoid receptor，MR）的變化。
　　 胰腺中部

5、行病理檢查觀察胰島β細胞變化，在此基礎上，著重觀察是否存在細胞凋亡。采用TUNEL檢查凋亡細胞。及比較ALD拮抗劑作用后的效果。
　　 第三部分：ALD拮抗劑干預IR/MS的可能機制收集NS組、FS組和FS+S組的大鼠胰腺組織，分別提取胰腺尾部組織細胞提取總蛋白，采用Western blotting方法檢測胰腺組織中絲裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase，MAPK）和磷脂酰肌醇3 激

6、酶/蛋白激酶B (PI3-K/Akt)信號通路的變化。
　　 研究結果：
　　 第一部分：MS動物模型的評價高鹽高脂能夠誘導大鼠在12周后出現(xiàn)典型的IR/MS改變：
　　 ①高血壓：FS組較NS組大鼠血壓明顯增高（BP：189.43±12.83 vs 153.65±20.53，P＜0.01）；
　　 ②血脂異常：FS組較NS組大鼠血脂明顯增高(TC：1.51±0.24 vs.0.88±0.12，TG：0.

7、97±0.54 vs.0.31±0.17，LDL-C：0.90±0.23vs.0.53±0.23，三者均 P＜0.05，但HDL-C：0.83±0.17vs.0.89±0.13，P>0.05)；
　　 ③胰島素抵抗：FS組大鼠胰島素抵抗指數(shù)較NS組明顯升高(HOMA-IR index：2.45±0.36 vs.1.84±0.41，P＜0.01)；
　　 ④體重增加：FS組較NS組大鼠體重明顯增加（BW：326.45±6.

8、84vs.303.3±9.13，P＜0.01）。
　　 該模型指標符合代謝綜合征診斷標準，IR/MS模型構建成功。
　　 第二部分：在IR/MS模型中胰腺組織的ALD變化1、在IR/MS大鼠胰腺組織中ALD的含量較NS組明顯增高（5722.49±1156.13vs.2337.22±1350.09，P<0.01），提示MS模型存在胰腺ALD濃度升高。Western blotting檢測ALD結合的受體MR在FS組表達亦升高

9、，提示ALD濃度升高同時也激活了其受體的表達。
　　 2、免疫組化的結果顯示，與NS組比較，IR/MS大鼠胰腺組織的胰島素表達下降；而ALD拮抗劑螺內酯處理后胰島素表達則明顯增強。
　　 3、TUNEL結果顯示，與NS組比較，F(xiàn)S組細胞凋亡明顯增加，提示可能是胰島β細胞減少的原因。而ALD拮抗劑螺內酯處理后細胞凋亡明顯減少，提示ALD拮抗劑螺內酯對胰腺組織損傷及凋亡有明顯保護作用。
　　 第三部分：ALD拮抗劑干

10、預IR/MS的可能機制1、高鹽高脂飲食誘導的IR/MS大鼠胰腺組織中磷酸化的PKB活性減少，而螺內酯處理后其活性提高。
　　 2、在高鹽高脂飲食誘導的IR/MS大鼠胰腺組織中，p38的磷酸化明顯增強，而增加螺內酯后MAPK磷酸化得到了抑制。
　　 結論：
　　 1、高鹽高脂飲食誘導的代謝綜合征大鼠的胰腺組織醛固酮含量明顯增加。
　　 2、螺內酯 (ALD拮抗劑)能夠明顯改善高鹽高脂飲食誘導的代謝綜合征，改