檉柳金屬硫蛋白基因（MT）的功能驗(yàn)證及轉(zhuǎn)MT基因山新楊的獲得.pdf

1、將檉柳(Tamarix．Sp)金屬硫蛋白基因(MT<,1>)插入到植物表達(dá)載體pBIl21中，利用農(nóng)桿菌(Agrobactrium tumefaciens)介導(dǎo)法將MT<,1>因?qū)霟煵莼蚪M，培育轉(zhuǎn)基因煙草。轉(zhuǎn)基因煙草T<,1>代植株的卡那霉素抗性分析表明，多數(shù)轉(zhuǎn)基因植株后代表現(xiàn)為3∶1的分離比例，少數(shù)轉(zhuǎn)基因植株的抗性分離表現(xiàn)為15：1或不符合孟德?tīng)栠z傳分離比例。說(shuō)明整合到煙草基因組的外源基因多為單拷貝基因，少數(shù)為多拷貝基因。對(duì)分離比

2、為3∶1的卡那霉素抗性植株進(jìn)行PCR、PCR-Southern檢測(cè)和Northern雜交分析證明：MT<,1>基因已經(jīng)整合到煙草基因組中，并且可以通過(guò)有性生殖傳遞給后代；外源MT<,1>基因的轉(zhuǎn)基因后代中能繼續(xù)表達(dá)，但不同株系的外源基因表達(dá)水平不盡相同，T<,1>-1和T<,1>-6的外源基因表達(dá)量較高，T<,1>-3和T<,1>-8的外源基因表達(dá)量較低。 分析非轉(zhuǎn)基因煙草株系和4個(gè)轉(zhuǎn)MT<,1>基因煙草株系T<,1>代在CdC

3、l<,2>和NaCl脅迫條件下，株高、鮮重、超氧化物歧化酶(SOD)活性、過(guò)氧化物酶(POD)活性、丙二醛(MDA)含量、葉綠素含量等生長(zhǎng)性狀和生理特性的變化情況表明：非轉(zhuǎn)基因煙草株系和轉(zhuǎn)．MT<,1>基因煙草株系在CdCl<,2>和NaCl脅迫下，生長(zhǎng)性狀和生理特性表現(xiàn)出相似的變化趨勢(shì)。但轉(zhuǎn)基因植株的株高、鮮重、葉綠素含量、POD活性、SOD活性等均比非轉(zhuǎn)基因株系明顯增加；MDA含量比非轉(zhuǎn)基因株系明顯降低。 用同樣的方法將MT