鹽穗木金屬硫蛋白HcMT的功能活性分析及轉基因植物的研究.pdf

1、碩士研究生學位論文新疆大學論文題目論文題目(中文中文)：鹽穗木金屬硫蛋白HcMT的功能活性分析及轉基因植物的研究論文題目論文題目(外文外文)：FunctionanalysistransgenictobaccoofmetallothioneinHcMTfromHalostachyscaspica研究研究生姓名：姓名：孟紅恩孟紅恩學科學科專業(yè)：專業(yè)：生物學生物學研究方向：向：生物化學與分子生物學生物化學與分子生物學導師導師姓名：姓名：劉忠淵

2、劉忠淵論文答辯日期2016年5月28日學位授予日期2016年6月I摘要在植物界廣泛存在的金屬硫蛋白（Metallothioneins，MTs）是一類可與金屬離子結合的、富含半胱氨酸殘基（1030%）的小分子蛋白，可以被眾多非生物因素誘導產生，其所具有的強烈的清除自由基和結合重金屬離子的能力使其成為植物研究的熱點。鹽穗木（Halostachyscaspica）金屬硫蛋白HcMT含有78個氨基酸，其中半胱氨酸數(shù)量為14個，理論分子量為7.7

3、0kD，理論等電點為5.05。生物信息學分析結果顯示，HcMT符合典型的植物Type2型MT序列特征，通過MEGA4.0系統(tǒng)進化樹分析與其它一些Type2型MT進化起源表明，其和海蓬子（Salicniabrachiata）的親緣關系較近，氨基酸相似性達93%。為研究HcMT的功能活性，將HcMT基因亞克隆至pGEX6p2原核表達載體上，在大腸桿菌BL21中表達，分離純化融白蛋白GSTHcMT，通過原子吸收分光光度法測定GSTHcMT結合

4、金屬離子的量以判斷其與金屬離子的結合能力。結果顯示，誘導表達的GSTHcMT分子量在34kD左右，與預期一致，且通過Westernblot進一步得到驗證；誘導的同時添加金屬離子，分離純化GSTHcMT與金屬離子復合物后，原子吸收結果表明其具有結合Cu2、Zn2、Pb2、Cd2的能力，結合量分別是對照的25倍、10倍、4倍和2倍，結合能力大小依次是：Cu2Cd2Zn2Pb2。同時發(fā)現(xiàn)，工程菌pGEX6p2HcMTBL21具有耐受H2O2、

5、NaHCO3、Na2CO3的能力。將其亞克隆至pET32a原核表達載體，E.coliBL21表達后分離純化融合蛋白TrxAHcMT，Westernblot鑒定其活性。采取與GSTHcMT相同的研究策略，發(fā)現(xiàn)TrxAHcMT與GSTHcMT相比可以特異性的結合更多的金屬離子，如Cd2、Co2、Cu2、Fe3、Mg2、Pb2、Zn2、Hg2。在Cd2、Cu2、Zn2脅迫下，含pET32aHcMTBL21的工程菌繁殖速度明顯優(yōu)于含pET32a