依達(dá)拉奉對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠視網(wǎng)膜光損傷的保護(hù)作用.pdf

1、光是視覺(jué)系統(tǒng)進(jìn)化以及發(fā)育的動(dòng)力，視網(wǎng)膜是形成視覺(jué)的重要組織，外界光線只有到達(dá)正常功能的視網(wǎng)膜才能形成視覺(jué)。任何光線的強(qiáng)度、光照時(shí)間等超過(guò)了視網(wǎng)膜的承受力都會(huì)造成視網(wǎng)膜光損傷。
　　 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)光損傷大鼠行腹腔內(nèi)注射氧自由基清除劑依達(dá)拉奉，觀察光照后不同時(shí)間視網(wǎng)膜組織病理學(xué)改變，檢測(cè)光損傷后視網(wǎng)膜組織內(nèi)氧自由基的表達(dá)，探討視網(wǎng)膜光損傷的發(fā)生機(jī)制以及氧自由基清除劑依達(dá)拉奉對(duì)光損傷視網(wǎng)膜的保護(hù)作用，為臨床治療提供理論依據(jù)。
　

2、　 我們選用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為SD大鼠(雌雄不限，7-10周齡，體重220±20g)隨機(jī)分成四組。Ⅰ組：正常對(duì)照組(n=32)；Ⅱ組：光損傷組(n=32)；Ⅲ組：生理鹽水+光損傷組(n=32)；Ⅳ組：依達(dá)拉奉+光損傷組(n=32)。分別于光照后0.5、1、6、10d各時(shí)相點(diǎn)取八只動(dòng)物。
　　 實(shí)驗(yàn)前所有大鼠均在12h明(120±10lux)12h暗的循環(huán)光環(huán)境下飼養(yǎng)7d。暗適應(yīng)36h后Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ三組乙醚吸入麻醉，散瞳，縫線開(kāi)瞼。待大

3、鼠清醒后放入自制光照箱中(光照度13260±440lux)照射2h。光照前3dⅢ組大鼠每天腹腔注射生理鹽水3mg/kg一次，Ⅳ組大鼠每天腹腔注射依達(dá)拉奉3mg/kg一次。分別于光照后0.5、1、6、10d處死大鼠摘取眼球視網(wǎng)膜組織。右眼的視網(wǎng)膜組織行HE以及TUNEL(終末脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的原位末端缺口標(biāo)記法，TDT-mediated dUTP nick-end labeling method，TUNEL)法染色，光鏡下觀察組織

4、細(xì)胞病理學(xué)改變，分析視網(wǎng)膜外核層(out nuclear layer,ONL)厚度變化，檢測(cè)視網(wǎng)膜外核層凋亡細(xì)胞數(shù)(用凋亡指數(shù)表示)。左眼的視網(wǎng)膜組織分別應(yīng)用黃嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。通過(guò)以上研究方法來(lái)探討視網(wǎng)膜光損傷的發(fā)生機(jī)制，了解氧自由基與視網(wǎng)膜光損傷的關(guān)系。
　　 實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果可見(jiàn)以下改變(1)視網(wǎng)膜組織形態(tài)學(xué)結(jié)果：Ⅰ組大鼠視網(wǎng)膜組織形態(tài)正常，結(jié)構(gòu)層次分明，內(nèi)外節(jié)排列

5、規(guī)整，分界清晰；Ⅱ組和Ⅲ組大鼠視網(wǎng)膜外核層隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸變薄，內(nèi)外節(jié)腫脹，核碎裂，排列紊亂，TUNEL染色可見(jiàn)較多陽(yáng)性感光細(xì)胞核，在1d時(shí)較為明顯；Ⅳ組與Ⅲ組視網(wǎng)膜組織在對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)相比較可見(jiàn)感光細(xì)胞核排列較為緊密，內(nèi)外節(jié)結(jié)構(gòu)較為完整、清楚，視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞與感光細(xì)胞的外節(jié)銜接較好。(2)視網(wǎng)膜外核層厚度檢測(cè)：Ⅰ組視網(wǎng)膜外核層厚度最厚，組內(nèi)各時(shí)相點(diǎn)統(tǒng)計(jì)差別無(wú)顯著性意義(P＞0.05)。Ⅱ組和Ⅲ組視網(wǎng)膜外核層厚度隨光照后時(shí)間延長(zhǎng)逐漸變薄，

6、組內(nèi)各時(shí)相比較均有顯著性意義(P＜0.05).兩組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別。Ⅳ組外核層厚度隨時(shí)間變化亦呈逐漸變薄的趨勢(shì)，各時(shí)相點(diǎn)與Ⅲ組的比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05).(3)凋亡細(xì)胞檢測(cè)：Ⅰ組視網(wǎng)膜外核層偶可見(jiàn)被TUNEL染色法標(biāo)記的陽(yáng)性凋亡細(xì)胞核;Ⅱ組和Ⅲ組在光照后1d凋亡細(xì)胞核染色陽(yáng)性最多，凋亡指數(shù)最高，6d時(shí)明顯減少。組間各時(shí)相無(wú)明顯差異(P＞0.05)。Ⅳ組各時(shí)相凋亡指數(shù)均小于Ⅱ組和Ⅲ組，差異有顯著性意義。(4)視網(wǎng)膜組織中MDA含

7、量和SOD濃度的變化：Ⅱ組和Ⅲ組視網(wǎng)膜光損傷后MDA濃度在第1d時(shí)最高(P＜0.01)，之后有所降低;SOD活性明顯降低，在第1d最低(P＜0.01)，之后有所升高，兩組間無(wú)明顯差異；Ⅳ組MDA濃度在光損傷后0.5、1d和6d明顯低于Ⅲ組，但是高于正常對(duì)照組，SOD活性各時(shí)相均明顯高于Ⅲ組而低于正常對(duì)照組，組間指標(biāo)比較差異均有顯著性意義(P＜0.01)。
　　 通過(guò)該實(shí)驗(yàn)研究我們認(rèn)為光照引起的視網(wǎng)膜損傷是一種細(xì)胞凋亡的改變，視網(wǎng)