硫化氫對幽門螺桿菌誘導的炎癥相關因子NF-κB及IL-8 mRNA表達的影響.pdf

1、本研究分為二部分：
　　 第一部分、幽門螺桿菌感染胃潰瘍CSE、NF-κB及IL-8 mRNA表達變化
　　 目的：
　　 研究幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，H.pylori)感染胃潰瘍患者胱硫醚-γ-裂解酶[cystathionine-γ-lyase，CSE，為硫化氫合成酶，間接反映內(nèi)源性硫化氫（hydrogen sulfide，H2S）含量]，及其炎癥相關因子NF-κB和IL-8 mRN

2、A表達情況，探討H2S在H.pylori相關性胃潰瘍中的作用及機制。
　　 方法：
　　 收集2011年4月至2011年12月就診于湘雅三醫(yī)院行胃鏡檢查的患者共計108例，通過快速尿素酶試驗(RUT)、14C尿素呼氣試驗(14C-UBT)、病理學檢查及H.pylori培養(yǎng)，明確H.pylori感染情況，其中正常對照組、H.pylori陰性胃潰瘍組和H.pylori陽性胃潰瘍組各36例。采用逆轉(zhuǎn)錄PCR技術檢測胃黏膜組織C

3、SE、NF-κB及IL-8mRNA表達，用灰度分析儀測量各灰度值，計算各灰度值與內(nèi)參(GAPDH)灰度值之比;并對各基因之間的相關性進行分析。
　　 結果：
　　 1、各組CSE、NF-κB及IL-8 mRNA表達
　　 1)CSE mRNA表達:H.pylori陰性胃潰瘍組和H.pylori陽性胃潰瘍組較正常對照組CSE mRNA表達升高(p＜0.05); H.pylori陽性胃潰瘍組較H.pylori陰性胃潰

4、瘍組CSE mRNA表達升高(p＜0.05)。
　　 2)NF-κB mRNA表達:H.pylori陰性胃潰瘍組和H.pylori陽性胃潰瘍組較正常對照組NF-κB mRNA表達升高(p＜0.05); H.pylori陽性胃潰瘍組較H.pylori陰性胃潰瘍組NF-κB mRNA表達升高(p＜0.05)。
　　 3)IL-8 mRNA表達:H.pylori陰性胃潰瘍組和H.pylori陽性胃潰瘍組較正常對照組IL-8 m

5、RNA表達升高(p＜0.05); H.pylori陽性胃潰瘍組較H.pylori陰性胃潰瘍組IL-8 mRNA表達升高(p＜0.05)。
　　 2、各組三種基因表達的相關性分析:
　　 1)正常對照組:CSE與NF-κB mRNA、CSE與IL-8 mRNA表達均無相關性(p＞0.05);NF-κB與IL-8 mRNA表達呈正相關(r=0.78)(p＜0.05)。
　　 2) H.pylori陰性胃潰瘍組:CSE

6、與NF-κB mRNA表達(r=0.98)、CSE與IL-8 mRNA表達(r=0.95)、NF-κB與IL-8 mRNA表達(r=0.90)均呈正相關(p＜0.05)。
　　 3) H.pylori日性胃潰瘍組:CSE與NF-κB mRNA表達(r=0.99)、CSE與IL-8 mRNA表達(r=0.85)、NF-κB與IL-8 mRNA表達(r=0.90)均呈正相關(p＜0.05)。
　　 結論：胃潰瘍患者胃黏膜組織

7、CSE mRNA表達升高，及與炎癥相關因子NF-κB和IL-8 mRNA表達呈正相關，并與H.pylori感染有關,提示H.pylori可能通過NF-κB途徑刺激IL-8 mRNA產(chǎn)生，導致炎癥反應及CSE mRNA表達升高。
　　 第二部分、硫化氫對幽門螺桿菌感染GES-1細胞CSE.NF-κB及IL-8mRNA表達的影響
　　 目的：
　　 探討外源性硫化氫(hydrogen sulfide, H2S)對H.

8、pylori感染的GES-1細胞CSE、NF-κB及IL-8mRNA表達的影響。
　　 方法：
　　 GES-1細胞體外培養(yǎng)24h后,待細胞融合達到80%～90%時分為A組(對照組,不加H.pylori與NaHS)、B組(H.pylori組)、C組(NaHS組,分別加入50μM、100μM、200μM、400μM NaHS,依NaHS濃度分為C1、C2、C3、C4組),D組(H.pylori+NaHS組,分別加入H.py

9、lori與50μM、100μM、200μM、400μM NaHS,依NaHS濃度分為D1、D2、D3、D4組)。H.pylori與細胞數(shù)量之比為100：1,每組分別培養(yǎng)3h、6h及12h,采用逆轉(zhuǎn)錄PCR技術檢測各組GES-1細胞CSE、NF-κB及IL-8mRNA表達情況,用灰度分析儀測量各灰度值,計算其與內(nèi)參(GAPDH)灰度值之比,并對各基因之間的相關性進行分析。
　　 結果：
　　 1、各組GES-1細胞CSE、

10、NF-κB及IL-8mRNA表達
　　 (1) CSE mRNA表達：同一時間點不同分組間比較顯示,H.pylori組、H.pylori組、H.pylori+100μM NaHS組較對照組表達增加(p<0.05),200μM NaHS組與400μM NaHS組較對照組表達降低(p<0.05)；NaHS各組、H.pylori+200μM NaHS組及H.pylori+400μM NaHS組較H.pylori組表達降低(p<0.05

11、)。同一分組不同時間點兩兩比較顯示,6h與12h H.pylori組、200μM NaHS組、400μM NaHS組、H.pylori+50μM NaHS組及H.pylori+100μM NaHS組較3h時表達降低(p<0.05)。
　　 (2)NF-κB mRNA表達：同一時間點不同分組間比較顯示,H.pylori組、H.pylori+50μM NaHS組、H.pylori+100μM NaHS組較對照組表達增加(p<0.05

12、),其余各組較對照組無統(tǒng)計學差異(p>0.05)；NaHS各組、H.pylori+200μM NaHS組及H.pylori+400μM NaHS組較H.pylori組表達均降低(p<0.05)。同一分組不同時間點兩兩比較顯示,6h與12h H.pylori組、H.pylori+50μM NaHS組、H.pylori+100μM NaHS組較3h時表達降低(p<0.05)。
　　 (3) IL-8mRNA表達：同一時間點不同分組間

13、比較顯示,H.pylori組、H.pylori+NaHS各組較對照組表達增加(p<0.05),NaHHS各組與對照組比較無統(tǒng)計學差異(p>0.05)；NaHS各組、H.pylori+200μM NaHS組及H.pylori+400μM NaHS組較H.pylori組表達均降低(p<0.05)。同一分組不同時間點兩兩比較顯示,6h時H.pylori組、H.pylori+50μM NaHS組及H.pylori+100μM NaHS組較3h時

14、表達升高(p<0.05)；12h時H.pylori組、H.pylori+50μM NaHS組及H.pylori+100μM NaHS組較6h時表達降低(p<0.05)。
　　 2、GES-1細胞CSE、NF-κB及IL-8mRNA的相關性
　　 H.pylori干預GES-1細胞,及200μM、400μM NaHS干預H.pylori感染的GES-1細胞3h、6h及12h時,CSE、NF-κB及IL-8mRNA表達之間均