肝細(xì)胞癌中CDKN2A基因甲基化及在臨床上應(yīng)用的研究.pdf

1、南開(kāi)大學(xué)博士學(xué)位論文9689工5肝細(xì)胞癌中∞—黝基因甲基化及在臨床上應(yīng)用的研究天津市重點(diǎn)科技攻關(guān)專(zhuān)項(xiàng)(05YFsJsF02500)、天津市重點(diǎn)基金(033801011)資助培養(yǎng)院系：生僉科堂堂醫(yī)一級(jí)學(xué)科：壘塹堂二級(jí)學(xué)科：選僮堂論文作者：揚(yáng)越指導(dǎo)教師：塞塞苴麴攫南開(kāi)大學(xué)研究生院2006年4月摘要是MSP引物。這一設(shè)計(jì)使得BSMSP除具體普通巢式PCR的高靈敏度和高特異性外，還可以在第一次PCR中對(duì)模板的質(zhì)量進(jìn)行評(píng)估以避免進(jìn)一步的假性結(jié)果產(chǎn)

2、物，而且，其產(chǎn)物還可同時(shí)用于甲基化與非甲基化特異性擴(kuò)增。在我國(guó)及亞洲其他地區(qū)，肝癌的發(fā)生常與HBV感染相關(guān)。根據(jù)這一特點(diǎn)，本文利用BSMSP技術(shù)對(duì)40例HBV相關(guān)肝癌中cD刪捌基因的甲基化情況進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果除3例標(biāo)本因模板質(zhì)量而無(wú)法檢測(cè)外，其余有78％(29／37)的病例在癌組織有甲基化發(fā)生。目前國(guó)內(nèi)尚無(wú)對(duì)HBV相關(guān)肝癌CDKⅣ2A基因甲基化的研究，但這一結(jié)果與日本和韓國(guó)這兩個(gè)亞洲國(guó)家報(bào)道甲基化發(fā)生率(分別為727％和833％)比較接

3、近。同時(shí)，通過(guò)與其他小組的研究結(jié)果相比較可以發(fā)現(xiàn)，肝癌組織中HBV的存在可能會(huì)導(dǎo)致基因甲基化的發(fā)生率要高于那些沒(méi)有病毒感染背景的肝癌。對(duì)術(shù)后切緣部位的檢查不僅是對(duì)手術(shù)療效進(jìn)行評(píng)估的必要手段，而具對(duì)于病人的預(yù)后也有一定意義；但是常規(guī)的組織病理學(xué)方法并不能及時(shí)有效地發(fā)現(xiàn)那些微小的癌前病灶或新發(fā)腫瘤，因此目前已有很多分子生物學(xué)的方法開(kāi)始用于切緣檢查。本文首次將基因甲基化檢測(cè)的技術(shù)應(yīng)用于肝癌的切緣分析，以研究切緣部位在表觀(guān)遺傳學(xué)上的異常改變。在

4、20例肝癌手術(shù)切除的肝組織中，有35％(7／20)在切緣上存在CDK^24基因的甲基化。這個(gè)結(jié)果表明，在相當(dāng)～部分組織病理學(xué)檢查為陰性的切緣上，通過(guò)靈敏度較高的分子生物學(xué)技術(shù)還是能夠檢測(cè)到基因組在表觀(guān)遺傳學(xué)上的異常改變?；诨蚣谆姆肿忧芯壏治鰧?duì)于術(shù)后肝癌病人的預(yù)后可能具有一定的意義，但切緣處基因異常甲基化的發(fā)生是否最終會(huì)導(dǎo)致成新生腫瘤，并導(dǎo)致肝癌術(shù)后的局部復(fù)發(fā)，這還需要通過(guò)更長(zhǎng)時(shí)間的隨訪(fǎng)并獲得相關(guān)病理資料后才能進(jìn)行研究。在表觀(guān)遺傳

5、學(xué)的基礎(chǔ)理論方面，對(duì)于在甲基化向持家基因啟動(dòng)子區(qū)的延伸過(guò)程有兩種觀(guān)點(diǎn)，即“漸進(jìn)式”和“全或無(wú)”兩種方式。前者認(rèn)為基因的甲基化是隨著細(xì)胞的增殖和傳代逐漸向原本受到保護(hù)區(qū)域擴(kuò)散，這～過(guò)程是個(gè)甲基化與去甲基化同時(shí)發(fā)生的動(dòng)態(tài)過(guò)程；而后者則認(rèn)為甲基化的發(fā)生是個(gè)一過(guò)性的事件，它在很短的時(shí)間內(nèi)即可覆蓋整個(gè)CpG島。本文通過(guò)COBRA、MSSSCP及MSP產(chǎn)物直接測(cè)序等方法，對(duì)7例肝細(xì)胞癌的癌組織、癌旁組織和切緣組織中CD心它4基因甲基化模式和水平進(jìn)行