柑桔皮中黃酮類物質(zhì)的提取、分離及純化研究.pdf

1、柑桔類水果是全世界產(chǎn)量最大的水果之一、也是一種重要的經(jīng)濟(jì)植物，皮渣作為其主要副產(chǎn)物占柑桔總量的20％～40％，具有較大的利用價(jià)值；據(jù)研究，柑桔皮中含有豐富的生物活性物質(zhì)一黃酮類化合物。黃酮類藥物具有抗腦缺血作用、抗心肌缺血作用、抗心律失常作用、鎮(zhèn)痛作用、保肝護(hù)肝作用、對(duì)消化性潰瘍的保護(hù)作用、抗病毒、抗腫瘤作用等。此外，還有大量研究表明黃酮類天然產(chǎn)物有效成分有降壓、降血脂、抑制血小板聚集等多種藥理作用，說明天然產(chǎn)物黃酮類有效成分確有多種生

2、物學(xué)活性。為此，受到各國(guó)政府和醫(yī)藥、食品等行業(yè)的高度重視和關(guān)注。而黃酮類有效成分的提取又是其研發(fā)和應(yīng)用的關(guān)鍵技術(shù)和階段之一，但到目前為止，對(duì)柑桔皮黃酮資源提取方面的研究報(bào)道還不多，純化工藝和化學(xué)成分研究鮮見報(bào)道。為開發(fā)利用該資源，論文對(duì)其提取、分離、純化及化學(xué)成分結(jié)構(gòu)鑒定進(jìn)行了研究?，F(xiàn)將主要結(jié)果報(bào)告如下： 1、建立以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品的柑桔皮黃酮類含量測(cè)定方法，采用 3 種紫外—可見分光光度法對(duì)不同條件處理下的柑桔皮中總黃酮含量進(jìn)行了

3、測(cè)定和比較分析。研究表明，3 種分光光度測(cè)定方法中，黃酮含量以硝酸鋁顯色法(345 nm)為最高，直接測(cè)定法(270 nm)次之，氯化鋁顯色法(415 nm)最低；經(jīng)過HPLC檢測(cè)后，選定氯化鋁(275 nm)為顯色系統(tǒng)的含量測(cè)定方法。 2、為確定最優(yōu)的提取條件，利用中心組合設(shè)計(jì)對(duì)柑桔皮總黃酮纖維素酶法輔助提取工藝中的浸提時(shí)間(X<,2>)、浸提溫度(X<,4>)、pH值(X<,3>)和酶用量(X<,1>)4因子的最優(yōu)化組合進(jìn)行

4、了定量研究，建立并分析了各因子與黃酮得率(Y)關(guān)系的數(shù)學(xué)模型：Y=-17.41531250+7.14583333X<,1>+0.11956250X<,2>+2.52125000X<,3>+0.25337500X<,4>-6.36458333X<,1>*X<,1>-0.00064896X<,2>*X<,2>+0.00862500X<,2>*X<,3>-0.32958333X<,3>*X<,3>-0.01275000X<,3>*X<,4>-

5、0.00204583X<,4>*X<,4>。結(jié)果表明：最佳的工藝條件為酶用量0.55％、時(shí)間123 min、pH值4.4、溫度48℃。經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證，在此條件下，黃酮得率(3.51±0.13)％(n=3)，與理論計(jì)算值3.621669％基本一致?；貧w模型能較好地預(yù)測(cè)柑桔皮中總黃酮的提取得率。 3、對(duì)柑桔皮中的總黃酮進(jìn)行微波提取，采用L<,16>(4<'4>)正交優(yōu)化試驗(yàn)，以探討微波功率、液料比、輻照時(shí)間、pH值和提取次數(shù)對(duì)柑桔皮黃酮

6、提取率的影響。正交試驗(yàn)結(jié)果表明，微波法提取總黃酮的最佳條件是：微波功率400 W，輻照時(shí)間180 s，液料比50，pH值5。在此條件下提取兩次，所得總黃酮含量為3.37％。 4、采用二次通用旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)研究了柑桔皮中總黃酮的超聲波輔助提取工藝，并對(duì)建立的數(shù)學(xué)模型 Y=-10.20174246+0.19594606X<,1>+1.32168206X<,2>+0.19143333X<,3>+0.00024257X<,1>*X<,4>

7、-0.00125581X<,2>*X<,4>-0.00144333X<,1>*X<,1>-0.10808333X<,2>*X<,2>-0.00363833X<,3>*X<,3>-0.00006954X<,4>*X<,4>進(jìn)行了規(guī)劃求解及試驗(yàn)驗(yàn)證。結(jié)果表明：pH值(X<,2>)對(duì)總黃酮得率(Y)有極顯著影響，乙醇濃度(X<,1>)、液料比(X<,3>)以及時(shí)間(X<,4>)同乙醇濃度之間和時(shí)間同pH值之間的交互項(xiàng)對(duì)總黃酮得率有顯著影響，超

8、聲時(shí)間對(duì)總黃酮得率無(wú)明顯影響。經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證，當(dāng)pH值為5.6、乙醇濃度為75％、液料比為26、超聲時(shí)間為80 min時(shí)總黃酮得率最高，達(dá)(3.314±0.063)％(n=3)，與理論計(jì)算值3.348449％基本一致?；貧w模型可較好地預(yù)測(cè)柑桔皮中總黃酮的提取得率。 5、采用反相高效液相色譜測(cè)定了不同提取條件下柑桔皮中橙皮苷和柚皮苷的含量。色譜柱為ODS C<,18>柱(150 mm×4.6 mm i.d.)，流動(dòng)相為甲醇—水(體積比

9、為40/60)，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm，柱溫25℃。橙皮苷和柚皮苷的線性范圍分別為0.007168g/L～0.28 g/L和0.012288 g/L～10.48 g/L；二者含量分別為17.5～21.9 mg/g(RSD=2.2～3.1％)和2.14～2.39 mg/g(RSD=2.8～3.7％)；其平均回收率分別為96.5～101.4％(RSD=2.3～3.3％)和97.3～103.6％(RSD=2.8～3.