中藥龜板對帕金森病大鼠模型BMP4表達的影響.pdf

1、帕金森病(Parldnson’s disease,PD)又名震顫麻痹。好發(fā)生于中老年人，是中腦黑質和黑質紋狀體通路變性的疾病，其病變主要是由于黑質多巴胺(DA)能神經(jīng)元變性以及殘存神經(jīng)元細胞DA生物合成能力下降，從而導致紋狀體DA缺乏引起的。臨床上以進行性加重的運動緩慢、肌強直、靜止性震顫、姿勢步態(tài)異常、表情減少等為特征。 中醫(yī)認為帕金森病的病理實質在于肝腎陰虛，也涉及心脾兩臟。表現(xiàn)為顫振、僵直、行動徐緩等癥狀的原因是由于本虛基

2、礎上形成了內風痰火瘀等病理改變的結果。內風痰火瘀是相互影響的病理因素，其相互影響的共同通路是經(jīng)脈，其最終的病理結局是筋脈失養(yǎng)。本病多屬于本虛標實，其中肝腎虧損，氣血不足是其本；風、火、痰、瘀為其標。中醫(yī)理論認為：腎主骨，生髓。從滋陰益腎入手，大補腎元，填精益髓，充養(yǎng)精血。用血肉有情之品類的中藥：龜板，治療帕金森病是本實驗的創(chuàng)新之處。抗帕金森病的西藥大多具有副作用，并且隨著用藥時間的延長療效會逐年減低，尋找新的有效藥物仍是帕金森病研究的重

3、要課題。 研究目的: 本課題以骨形成蛋白4(BMP4)為突破口，探討益腎中藥龜板對帕金森大鼠模型的治療作用。因BMPs是影響神經(jīng)發(fā)育的重要基因組之一，在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的不同時期、不同部位，BMPs均起著相當重要的作用。而BMP4是BMPs中較重要的一種蛋白，也是一種早期的神經(jīng)嵴誘導因子，BMP4受體信號的阻斷而引起在神經(jīng)嵴的神經(jīng)發(fā)生，因此BMP4在早期神經(jīng)發(fā)育的誘導分化中有重要作用。由此推測，BMP4也可能在神經(jīng)損傷的修復

4、中起重要作用。 研究方法： 本研究從分子生物學角度，采用熒光定量PCR、ELISA．、Western Blotting等多種實驗技術，從轉錄和翻譯水平及蛋白質水平定性和定量地檢測中藥龜板對帕金森病大鼠體內BMP4、BMP4 mRNA、TH、NSE表達的影響。 本研究完成了帕金森病大鼠模型的建立。采用左側黑質，紋狀體內兩點注射6-OHDA(6-羥基多巴胺)的方法建立帕金森病大鼠模型，并檢測其旋轉行為40min，每周

5、測試1次，持續(xù)12周。每分鐘旋轉圈數(shù)大于6圈者定為PD模型。 研究結果： 本研究完成了BMP4熒光定量PCR、BMP4 ELISA以及BMP4、TH、NSE的Western．Blotting檢測。實驗結果表明正常情況下黑質與紋狀體的BMP4都呈低表達，損傷后升高，隨后下降，出現(xiàn)雙峰波形；其中紋狀體BMP4的表達情況與其mRNA表達情況一致，說明其基因水平與蛋白水平表達一致。損傷后黑質的BMP4 mRNA下降，理論上BMP

6、4蛋白生成應該減少，但ELISA結果顯示黑質仍有較高BMP4蛋白表達，可能因為BMP4是重要的神經(jīng)營養(yǎng)因子，黑質損傷后BMP4產生減少，反饋性引起其他腦區(qū)神經(jīng)組織BMP4旁分泌增加，其產生和來源機制值得進一步深入探討。 本研究在“腎主骨、生髓”的中醫(yī)理論指導下，在前期實驗基礎之上進一步探討滋陰益腎中藥龜板對帕金森病大鼠模型的治療作用。并完成了用藥治療后的PD模型大鼠的腦組織的熒光定量PCR、ELISA等實驗。實驗結果顯示：用龜板