中藥龜板對(duì)帕金森病大鼠模型BMP4表達(dá)的影響.pdf

1、帕金森病(Parldnson’s disease,PD)又名震顫麻痹。好發(fā)生于中老年人，是中腦黑質(zhì)和黑質(zhì)紋狀體通路變性的疾病，其病變主要是由于黑質(zhì)多巴胺(DA)能神經(jīng)元變性以及殘存神經(jīng)元細(xì)胞DA生物合成能力下降，從而導(dǎo)致紋狀體DA缺乏引起的。臨床上以進(jìn)行性加重的運(yùn)動(dòng)緩慢、肌強(qiáng)直、靜止性震顫、姿勢(shì)步態(tài)異常、表情減少等為特征。 中醫(yī)認(rèn)為帕金森病的病理實(shí)質(zhì)在于肝腎陰虛，也涉及心脾兩臟。表現(xiàn)為顫振、僵直、行動(dòng)徐緩等癥狀的原因是由于本虛基

2、礎(chǔ)上形成了內(nèi)風(fēng)痰火瘀等病理改變的結(jié)果。內(nèi)風(fēng)痰火瘀是相互影響的病理因素，其相互影響的共同通路是經(jīng)脈，其最終的病理結(jié)局是筋脈失養(yǎng)。本病多屬于本虛標(biāo)實(shí)，其中肝腎虧損，氣血不足是其本；風(fēng)、火、痰、瘀為其標(biāo)。中醫(yī)理論認(rèn)為：腎主骨，生髓。從滋陰益腎入手，大補(bǔ)腎元，填精益髓，充養(yǎng)精血。用血肉有情之品類的中藥：龜板，治療帕金森病是本實(shí)驗(yàn)的創(chuàng)新之處?？古两鹕〉奈魉幋蠖嗑哂懈弊饔?，并且隨著用藥時(shí)間的延長療效會(huì)逐年減低，尋找新的有效藥物仍是帕金森病研究的重

3、要課題。 研究目的: 本課題以骨形成蛋白4(BMP4)為突破口，探討益腎中藥龜板對(duì)帕金森大鼠模型的治療作用。因BMPs是影響神經(jīng)發(fā)育的重要基因組之一，在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的不同時(shí)期、不同部位，BMPs均起著相當(dāng)重要的作用。而BMP4是BMPs中較重要的一種蛋白，也是一種早期的神經(jīng)嵴誘導(dǎo)因子，BMP4受體信號(hào)的阻斷而引起在神經(jīng)嵴的神經(jīng)發(fā)生，因此BMP4在早期神經(jīng)發(fā)育的誘導(dǎo)分化中有重要作用。由此推測(cè)，BMP4也可能在神經(jīng)損傷的修復(fù)

4、中起重要作用。 研究方法： 本研究從分子生物學(xué)角度，采用熒光定量PCR、ELISA．、Western Blotting等多種實(shí)驗(yàn)技術(shù)，從轉(zhuǎn)錄和翻譯水平及蛋白質(zhì)水平定性和定量地檢測(cè)中藥龜板對(duì)帕金森病大鼠體內(nèi)BMP4、BMP4 mRNA、TH、NSE表達(dá)的影響。 本研究完成了帕金森病大鼠模型的建立。采用左側(cè)黑質(zhì)，紋狀體內(nèi)兩點(diǎn)注射6-OHDA(6-羥基多巴胺)的方法建立帕金森病大鼠模型，并檢測(cè)其旋轉(zhuǎn)行為40min，每周

5、測(cè)試1次，持續(xù)12周。每分鐘旋轉(zhuǎn)圈數(shù)大于6圈者定為PD模型。 研究結(jié)果： 本研究完成了BMP4熒光定量PCR、BMP4 ELISA以及BMP4、TH、NSE的Western．Blotting檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明正常情況下黑質(zhì)與紋狀體的BMP4都呈低表達(dá)，損傷后升高，隨后下降，出現(xiàn)雙峰波形；其中紋狀體BMP4的表達(dá)情況與其mRNA表達(dá)情況一致，說明其基因水平與蛋白水平表達(dá)一致。損傷后黑質(zhì)的BMP4 mRNA下降，理論上BMP

6、4蛋白生成應(yīng)該減少，但ELISA結(jié)果顯示黑質(zhì)仍有較高BMP4蛋白表達(dá)，可能因?yàn)锽MP4是重要的神經(jīng)營養(yǎng)因子，黑質(zhì)損傷后BMP4產(chǎn)生減少，反饋性引起其他腦區(qū)神經(jīng)組織BMP4旁分泌增加，其產(chǎn)生和來源機(jī)制值得進(jìn)一步深入探討。 本研究在“腎主骨、生髓”的中醫(yī)理論指導(dǎo)下，在前期實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)之上進(jìn)一步探討滋陰益腎中藥龜板對(duì)帕金森病大鼠模型的治療作用。并完成了用藥治療后的PD模型大鼠的腦組織的熒光定量PCR、ELISA等實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：用龜板