核酸疫苗免疫MPTP慢性帕金森病小鼠實驗研究.pdf

1、目的：1、研究hα-突觸核蛋白核酸疫苗免疫1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(MPTP)慢性帕金森病(PD)小鼠的治療效應。2、研究ha-syn核酸疫苗免疫1-甲基-4-苯基.1，2，3，6-四氫吡啶(MPTP)慢性帕金森病(PD)小鼠后中腦黑質部炎性反應變化情況。 方法：將由本實驗室成功構建的ha-syn核酸疫苗利用Qiagen質粒提取試劑盒制備大劑量ha-syn核酸疫苗并純化。24只MPTP慢性帕金森病小鼠隨機分為

2、3組：實驗組、空質粒對照組和PBS對照組，各組小鼠分別肌注PVAXl-ha-syn重組質粒，PVAXl空質粒和PBS各100ul，共免疫3次，每次間隔3周。末次免疫后2周，觀察各組小鼠的行為學改變；在形態(tài)學上采用HE染色法觀察黑質多巴胺細胞數(shù)量改變和小膠質細胞激活情況；采用SP免疫組織化學法檢測α-突觸核蛋白和黑質酪氨酸羥化酶(TH)的改變；采用SP免疫組織化學法檢測中腦黑質部小膠質細胞激活情況和腫瘤壞死因子-α的表達改變。研究分析PV

3、AXl-ha-syn誘導的免疫效應。 結果：1、行為學觀察結果：PVAXl-ha-syn核酸疫苗免疫組小鼠的類帕金森病樣癥狀與空質粒組和PBS對照組相比減輕，疫苗組小鼠爬桿時間較空質粒組及生理鹽水對照組縮短，并有顯著差異(p＜0.01)。2、形態(tài)學檢查結果：HE 染色法染色后，疫苗組與空質粒組及生理鹽水對照組比較，黑質區(qū)多巴胺能神經(jīng)元細胞數(shù)量增多，且激活小膠質細胞略增多。3、SP免疫組織化學法結果：(1)與空質粒組及生理鹽水對照

4、組比較，疫苗組小鼠中腦黑質部α-syn陽性染色減少，積分光密度值(IOD)降低，小鼠中腦黑質α-syn表達較對照組減少約30％，且具有顯著差異(p＜0.01)；小鼠中腦黑質部TH免疫組織化學染色陽性細胞數(shù)增多，陽性細胞數(shù)(CPC)與空質粒組及生理鹽水對照組比較，多巴胺能神經(jīng)元數(shù)目增多了31％-39％，均有顯著差異(p＜0.01)；而空質粒組與生理鹽水對照組比較，黑質α-syn表達和多巴胺能神經(jīng)元數(shù)目均無顯著差異(p＞0.05)。(2)疫

5、苗組與空質粒組及生理鹽水對照組比較，小鼠中腦黑質部CD11b及TNF-α免疫組織化學染色陽性細胞數(shù)增多，積分光密度值(IOD)增多，與空質粒組及生理鹽水對照組比較均有顯著差異(p＜0.01)。 結論：1、ha-syn核酸疫苗具有較強的免疫原性，能對帕金森病小鼠產(chǎn)生較好的免疫治療作用：減輕了MPTP誘導的C57BL/6慢性帕金森病小鼠出現(xiàn)的類帕金森病癥狀；中腦黑質部α-突觸核蛋白表達減少，多巴胺能神經(jīng)元數(shù)目增多。2、ha-syn核