核酸疫苗免疫MPTP慢性帕金森病小鼠實驗研究.pdf

1、目的：1、研究hα-突觸核蛋白核酸疫苗免疫1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(MPTP)慢性帕金森病(PD)小鼠的治療效應(yīng)。2、研究ha-syn核酸疫苗免疫1-甲基-4-苯基.1，2，3，6-四氫吡啶(MPTP)慢性帕金森病(PD)小鼠后中腦黑質(zhì)部炎性反應(yīng)變化情況。 方法：將由本實驗室成功構(gòu)建的ha-syn核酸疫苗利用Qiagen質(zhì)粒提取試劑盒制備大劑量ha-syn核酸疫苗并純化。24只MPTP慢性帕金森病小鼠隨機分為

2、3組：實驗組、空質(zhì)粒對照組和PBS對照組，各組小鼠分別肌注PVAXl-ha-syn重組質(zhì)粒，PVAXl空質(zhì)粒和PBS各100ul，共免疫3次，每次間隔3周。末次免疫后2周，觀察各組小鼠的行為學(xué)改變；在形態(tài)學(xué)上采用HE染色法觀察黑質(zhì)多巴胺細(xì)胞數(shù)量改變和小膠質(zhì)細(xì)胞激活情況；采用SP免疫組織化學(xué)法檢測α-突觸核蛋白和黑質(zhì)酪氨酸羥化酶(TH)的改變；采用SP免疫組織化學(xué)法檢測中腦黑質(zhì)部小膠質(zhì)細(xì)胞激活情況和腫瘤壞死因子-α的表達(dá)改變。研究分析PV

3、AXl-ha-syn誘導(dǎo)的免疫效應(yīng)。 結(jié)果：1、行為學(xué)觀察結(jié)果：PVAXl-ha-syn核酸疫苗免疫組小鼠的類帕金森病樣癥狀與空質(zhì)粒組和PBS對照組相比減輕，疫苗組小鼠爬桿時間較空質(zhì)粒組及生理鹽水對照組縮短，并有顯著差異(p＜0.01)。2、形態(tài)學(xué)檢查結(jié)果：HE 染色法染色后，疫苗組與空質(zhì)粒組及生理鹽水對照組比較，黑質(zhì)區(qū)多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量增多，且激活小膠質(zhì)細(xì)胞略增多。3、SP免疫組織化學(xué)法結(jié)果：(1)與空質(zhì)粒組及生理鹽水對照

4、組比較，疫苗組小鼠中腦黑質(zhì)部α-syn陽性染色減少，積分光密度值(IOD)降低，小鼠中腦黑質(zhì)α-syn表達(dá)較對照組減少約30％，且具有顯著差異(p＜0.01)；小鼠中腦黑質(zhì)部TH免疫組織化學(xué)染色陽性細(xì)胞數(shù)增多，陽性細(xì)胞數(shù)(CPC)與空質(zhì)粒組及生理鹽水對照組比較，多巴胺能神經(jīng)元數(shù)目增多了31％-39％，均有顯著差異(p＜0.01)；而空質(zhì)粒組與生理鹽水對照組比較，黑質(zhì)α-syn表達(dá)和多巴胺能神經(jīng)元數(shù)目均無顯著差異(p＞0.05)。(2)疫

5、苗組與空質(zhì)粒組及生理鹽水對照組比較，小鼠中腦黑質(zhì)部CD11b及TNF-α免疫組織化學(xué)染色陽性細(xì)胞數(shù)增多，積分光密度值(IOD)增多，與空質(zhì)粒組及生理鹽水對照組比較均有顯著差異(p＜0.01)。 結(jié)論：1、ha-syn核酸疫苗具有較強的免疫原性，能對帕金森病小鼠產(chǎn)生較好的免疫治療作用：減輕了MPTP誘導(dǎo)的C57BL/6慢性帕金森病小鼠出現(xiàn)的類帕金森病癥狀；中腦黑質(zhì)部α-突觸核蛋白表達(dá)減少，多巴胺能神經(jīng)元數(shù)目增多。2、ha-syn核