β-synuclein在MPTP誘導的帕金森病慢性模型中的作用.pdf

1、帕金森病是一種非常常見的神經(jīng)退行性疾病，它的發(fā)生與多巴胺能神經(jīng)元發(fā)生退化相關，并且細胞內(nèi)α-synuclin(α-syn)蛋白的表達量會明顯增多，聚集形成包涵體路易小體。在帕金森病人的中腦黑質(zhì)腦區(qū)，細胞自噬水平增多，自噬相關蛋白的表達量也呈現(xiàn)增多趨勢，導致神經(jīng)元自噬性凋亡的產(chǎn)生，多巴胺能神經(jīng)元發(fā)生損傷和退化。β-synuclin(β-syn)作為α-syn的同源異構體，在體外細胞實驗中已經(jīng)被證實對α-syn蛋白的聚集會產(chǎn)生抑制作用，那么

2、在體內(nèi)β-syn會發(fā)揮哪些作用，是否對神經(jīng)元產(chǎn)生保護，以及通過哪種方式發(fā)揮作用的，本課題圍繞這一主題進行研究。
　　本研究構建了MPTP帕金森病慢性小鼠模型，通過分子克隆實驗獲得了野生型β-syn質(zhì)粒，并把β-syn質(zhì)粒包裝進人腺病毒中，帶有GFP標簽，使β-syn和GFP蛋白融合，之后把病毒通過微量注射的方法感染MPTP小鼠的中腦黑質(zhì)腦區(qū)，進行后期實驗。帕金森病往往伴隨著運動能力下降，因此行為學是檢測帕金森病的重要指標，本課題通

3、過步距、轉(zhuǎn)棒儀測試對微量注射了病毒的MPTP小鼠進行了行為指標的檢測。結果顯示，MPTP導致小鼠的步距減小，在轉(zhuǎn)棒儀上的時間縮短，與對照病毒組相比較，包裝有β-syn的病毒組步距增加，在轉(zhuǎn)棒儀上的時間增長，即β-syn能夠改善MPTP誘發(fā)的行為能力下降的現(xiàn)象。運用免疫熒光染色的方法，對病毒在腦內(nèi)的表達和β-syn表達進行觀察，結果顯示病毒可以成功感染注射腦區(qū)的神經(jīng)元，并且能夠投射到海馬、紋狀體等其它腦區(qū)。運用免疫組化和免疫印跡檢測α-s

4、yn蛋白表達情況，從結果可以看出，MPTP會導致α-syn蛋白異常過量表達，聚集程度增加，而β-syn過表達時會對這種情況產(chǎn)生抑制的效應。通過免疫染色以及免疫印跡的方法會發(fā)現(xiàn)，MPTP導致多巴胺能神經(jīng)元退化并丟失，同時黑質(zhì)區(qū)域神經(jīng)元放電頻率減少，β-syn過表達可以對多巴胺能神經(jīng)元產(chǎn)生保護作用，并促進神經(jīng)元放電頻率增加。通過免疫印跡對黑質(zhì)腦區(qū)組織蛋白進行自噬相關指標測定，從結果中可以看出MPTP能夠引起自噬相關蛋白表達量上升，自噬程度增

5、加，而注射包裝有β-syn的病毒組相比于對照病毒組，自噬相關蛋白含量降低，自噬受到抑制。在自噬的研究中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)自噬受多種因子、多種通路所影響，本課題對mTOR信號通路進行了研究，從免疫印跡結果以及統(tǒng)計結果可以知道，MPTP會引起促進自噬相關因子mTOR、p-4EBP1表達量增高，相比于對照病毒組，包裝有β-syn病毒組mTOR、p-4EBP1表達量減少，而抑制因子p-mTOR的表達量增多，說明β-syn可以抑制mTOR通路對自噬的促進作