WGA、RCA-I和ECL凝集素受體在過量維甲酸致昆明小鼠腭裂發(fā)生中的作用.pdf

1、目的：腭裂是發(fā)病率較高的一種先天性頜面部發(fā)育缺陷，一般認為，它的病因為基因和環(huán)境因素的聯(lián)合作用。腭的形成是一個極其復(fù)雜的生物學過程，受到諸多基因及調(diào)節(jié)因子的的嚴密調(diào)控，其中任何調(diào)節(jié)因子及相關(guān)基因的表達異常，都可能導致腭裂的發(fā)生。凝集素受體即是這些調(diào)節(jié)因子中的一員。
　　 凝集素受體是一類分布于細胞膜表面的糖蛋白、糖脂等糖復(fù)合物。凝集素受體上具有能被凝集素特異識別并結(jié)合的糖基。它們在細胞的生長、分化、細胞之間的黏附及相互識別中起重

2、要作用。維甲酸(RA)是維生素A在體內(nèi)的自然活性代謝物，也是胚胎發(fā)育過程中不可缺少的形態(tài)發(fā)生素。在小鼠腭組織發(fā)育敏感期，RA可誘發(fā)子代發(fā)生腭裂。本研究以昆明小鼠為研究對象，在RA致小鼠腭裂畸形動物模型上，利用親和細胞化學法探討麥胚凝集素(wheat germagglutinin，WGA)、蓖麻凝集素(ricinus communis agglutinin，RCA-I)和雞冠珊瑚樹凝集素(erythrina cristagalii lec

3、tin，ECL)三種受體在RA致胚胎腭裂畸形發(fā)生中的表達狀況和變化規(guī)律，以期闡明上述三種凝集素受體在過量RA致腭裂的發(fā)生機制，為腭裂的預(yù)防與治療提供實驗依據(jù)。
　　 方法：⑴RA致昆明小鼠腭裂畸形動物模型的建立：下午六時，昆明小鼠雌雄2:1合籠，次日早上陰栓陽性雌鼠定為孕0天(gestation day0，GDO)。孕鼠隨機分為實驗組和對照組。實驗組于GD10，一次性灌服RA芝麻油懸浮液，劑量為80mg/kg，對照組于相同時間一

4、次性灌服等量芝麻油。⑵麥胚凝集素(WGA)受體、蓖麻凝集素(RCA-I)受體及雞冠珊瑚樹凝集素(ECL)受體的檢測:實驗組和對照組孕鼠各隨機分為8小組，分別于GD138、GD1314、GD1322、GD148、GD1414、GD1422、GD158和GD1522等8個時間點剖宮取胚，常規(guī)石蠟切片。采用親和細胞化學法檢測WGA受體、RCA-I受體和ECL受體在各組不同時點腭板上皮和間充質(zhì)中的表達和分布狀況。
　　 結(jié)果：①WGA受

5、體親和組織化學染色結(jié)果：在正常對照和實驗各組的腭板上皮及其間充質(zhì)中WGA均有不同程度的表達。圖象分析結(jié)果顯示，伴隨胚胎發(fā)育，WGA在對照組腭板上皮中的表達量呈現(xiàn)先逐漸上升(GD138～GD1322)，而后逐漸下降(GD1322～GD1522)的趨勢。其峰值出現(xiàn)于GD1322時。在實驗組，其表達量則呈逐漸下降的趨勢。除GD138時明顯高于對照組(P＜0.05)，GD1314和GD1522時與對照組無顯著性差異外，其余各時間點均明顯低于相應(yīng)

6、對照組(P＜0.05，P＜0.01)。無論在對照組還是在實驗組，WGA在間充質(zhì)中的表達量均明顯低于在腭板上皮中的表達量。無論在對照組和實驗組，WGA在間充質(zhì)中的表達量均呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢，在各個時間點上，實驗組和對照組的表達量之間均無顯著性差異(P＞0.05)。②RCA-I受體親和組織化學染色結(jié)果：在正常對照組和實驗組腭板上皮和間充質(zhì)中，RCA-I也均有不同程度的表達。圖象分析結(jié)果顯示，伴隨胚胎發(fā)育，RCA-I在對照組腭板上皮中的表達量

7、呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢，其峰值出現(xiàn)于GD158時。在實驗組，伴隨胚胎發(fā)育，RCA-I表達量的波動較大，但其總趨勢與對照組大體相仿。除GD138和GD1414外，實驗組腭板上皮中RCA-I的表達量均顯著低于相應(yīng)對照組(P＜0.05，P＜0.01)。在對照組和實驗組，RCA-I在間充質(zhì)中的表達量均明顯低于在腭板上皮中的表達量；而且均呈現(xiàn)先下降而后逐漸上升的趨勢，但在各個時間點上，實驗組和對照組之間均無顯著性差異(P＞0.05)。③ECL受體親和

8、組織化學染色結(jié)果：在正常對照組和實驗組腭板上皮和間充質(zhì)中，ECL均有不同程度的表達。圖象分析結(jié)果顯示，伴隨胚胎發(fā)育，ECL在對照組腭板上皮中的表達量呈現(xiàn)先逐漸上升(GD138～GD1322)，而后逐漸下降(GD1322～GD1414)，最后又大幅上升(GD1414～GD1522)的趨勢。在實驗組腭板上皮，其變化趨勢與對照組大體相仿，在各個時間點，其表達量均顯著低于相應(yīng)對照組(P＜0.05，P＜0.01)。在對照組和實驗組ECL在間充質(zhì)中