EGF及Keratin5在小鼠腭突發(fā)育及維甲酸誘導(dǎo)腭裂發(fā)生過程中的表達(dá).pdf

1、目的： 唇腭裂是人類出生缺陷的重要組成部分，其發(fā)病率隨著地理位置和社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展程度的不同而不同，有一定差異性，平均是1.42‰。在我國(guó)高發(fā)，發(fā)生率約為1.82‰，位于先天性畸形的首位。唇腭裂是一種多基因易感性疾病；是基因與環(huán)境因素的交互作用造成的，而且在不同背景下的基因表現(xiàn)型不同，因此發(fā)病因素非常復(fù)雜，發(fā)生機(jī)制到目前仍未明確。隨著分子生物學(xué)等新技術(shù)的開發(fā)應(yīng)用，目前國(guó)外對(duì)畸形發(fā)生學(xué)的研究已開始從基因水平探討其發(fā)病原因和機(jī)理。

2、 在腭器官發(fā)育過程中，腭中嵴上皮(middle edge epithelial，MEE)細(xì)胞有其固定的轉(zhuǎn)歸形式，而其轉(zhuǎn)歸形式的改變可能與腭裂發(fā)生有著極為密切的關(guān)系。在此過程中，外源性致畸物質(zhì)可能影響了MEE細(xì)胞的正常轉(zhuǎn)歸而導(dǎo)致腭裂。 在已知的能誘發(fā)腭裂的致畸物質(zhì)中，維甲酸(retinoic acid，RA)是致畸作用比較顯著的一種。有學(xué)者認(rèn)為，過量的RA影響了MEE細(xì)胞的轉(zhuǎn)歸并抑制了間充質(zhì)(embryonic palatal

3、mesenchymae，EPM)細(xì)胞的增殖，而導(dǎo)致腭裂。 表皮生長(zhǎng)因子(epidermal growth factor，EGF)屬于細(xì)胞生長(zhǎng)因子，具有促進(jìn)多種細(xì)胞增殖分化的低分子多肽。研究發(fā)現(xiàn)EGF與的腭裂形成的關(guān)系密切，但其確切的機(jī)制尚不明確。Abbott等發(fā)現(xiàn)在胚齡12-15天的小鼠腭突中均有EGF表達(dá)，而且隨著發(fā)育的進(jìn)展EGF在腭突上皮和間充質(zhì)中的時(shí)空表達(dá)亦在變化。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)EGF可以在促進(jìn)鼠胚胎MEE和EPM的增殖。

4、 角蛋白5(Keratin5，K5)是角蛋白家族中的II型角蛋白。其分子量為58KDa。K5主要表達(dá)于復(fù)層上皮的基底細(xì)胞，稱為基底層標(biāo)志角蛋白。有研究發(fā)現(xiàn)K5在腭突發(fā)育的過程中在腭突上皮細(xì)胞中有特異性表達(dá)。目前國(guó)內(nèi)有關(guān)于K5在腭突的表達(dá)的研究的報(bào)道很少。 本次實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)用穩(wěn)定的腭裂畸形的動(dòng)物模型體系等，通過觀測(cè)EGF和K5在腭突中的表達(dá)情況，通過研究RA對(duì)EGF與K5在小鼠腭突的表達(dá)變化來探索唇腭裂畸形的發(fā)病機(jī)制以及為以后

5、的實(shí)驗(yàn)及臨床提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 利用已建立的RA誘導(dǎo)的腭裂小鼠模型，用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)EGF及K5在GD14d、GD15d及GD16d的對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組小鼠腭突中在蛋白水平的表達(dá)和分布變化(Gestation day，GD)。 結(jié)果： 1．在GD14-GD15的對(duì)照組小鼠腭突發(fā)育過程中，在MEE細(xì)胞發(fā)育中，EGF始終有表達(dá)，直至雙側(cè)腭突融合而MEE細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞凋亡，EGF在GD15水平融合期的MEE

6、細(xì)胞中表達(dá)開始下降；GD14與GD16口腔側(cè)上皮強(qiáng)于鼻腔側(cè)上皮；在EPM細(xì)胞發(fā)育中，EGF始終有表達(dá)，在GD15時(shí)，EPM中EGF的表達(dá)開始下降。 2．實(shí)驗(yàn)組中，在GD15時(shí)，MEE細(xì)胞中EGF表達(dá)增強(qiáng)并高于對(duì)照組。在GD14時(shí)，EPM中EGF表達(dá)減弱。 3．在GD14-GD15的對(duì)照組小鼠腭突發(fā)育過程中，在MEE細(xì)胞發(fā)育中，K5始終有表達(dá)，直至雙側(cè)腭突融合而MEE細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞凋亡，K5在GD15水平融合期的MEE細(xì)胞中

7、表達(dá)上升。 4.實(shí)驗(yàn)組中，在GD14-GD15時(shí)，MEE中K5的表達(dá)強(qiáng)于對(duì)照組并且在這兩個(gè)時(shí)期，K5的表達(dá)程度沒有發(fā)生變化。 結(jié)論： 1．在水平融合期(GD15)，實(shí)驗(yàn)組中EGF的表達(dá)發(fā)生上調(diào)，可能促進(jìn)MEE細(xì)胞的異常增殖進(jìn)而妨礙了MEE細(xì)胞的分化和轉(zhuǎn)歸，進(jìn)而誘發(fā)腭裂。 2．在接觸融合期(GD15)，K5在正常對(duì)照組MEE細(xì)胞中表達(dá)水平上調(diào)，而在未發(fā)生接觸融合的實(shí)驗(yàn)組MEE細(xì)胞中K5水平未見上調(diào)，提示K5