EGF及Keratin5在小鼠腭突發(fā)育及維甲酸誘導腭裂發(fā)生過程中的表達.pdf

1、目的： 唇腭裂是人類出生缺陷的重要組成部分，其發(fā)病率隨著地理位置和社會經(jīng)濟發(fā)展程度的不同而不同，有一定差異性，平均是1.42‰。在我國高發(fā)，發(fā)生率約為1.82‰，位于先天性畸形的首位。唇腭裂是一種多基因易感性疾病；是基因與環(huán)境因素的交互作用造成的，而且在不同背景下的基因表現(xiàn)型不同，因此發(fā)病因素非常復雜，發(fā)生機制到目前仍未明確。隨著分子生物學等新技術的開發(fā)應用，目前國外對畸形發(fā)生學的研究已開始從基因水平探討其發(fā)病原因和機理。

2、 在腭器官發(fā)育過程中，腭中嵴上皮(middle edge epithelial，MEE)細胞有其固定的轉(zhuǎn)歸形式，而其轉(zhuǎn)歸形式的改變可能與腭裂發(fā)生有著極為密切的關系。在此過程中，外源性致畸物質(zhì)可能影響了MEE細胞的正常轉(zhuǎn)歸而導致腭裂。 在已知的能誘發(fā)腭裂的致畸物質(zhì)中，維甲酸(retinoic acid，RA)是致畸作用比較顯著的一種。有學者認為，過量的RA影響了MEE細胞的轉(zhuǎn)歸并抑制了間充質(zhì)(embryonic palatal

3、mesenchymae，EPM)細胞的增殖，而導致腭裂。 表皮生長因子(epidermal growth factor，EGF)屬于細胞生長因子，具有促進多種細胞增殖分化的低分子多肽。研究發(fā)現(xiàn)EGF與的腭裂形成的關系密切，但其確切的機制尚不明確。Abbott等發(fā)現(xiàn)在胚齡12-15天的小鼠腭突中均有EGF表達，而且隨著發(fā)育的進展EGF在腭突上皮和間充質(zhì)中的時空表達亦在變化。體外實驗發(fā)現(xiàn)EGF可以在促進鼠胚胎MEE和EPM的增殖。

4、 角蛋白5(Keratin5，K5)是角蛋白家族中的II型角蛋白。其分子量為58KDa。K5主要表達于復層上皮的基底細胞，稱為基底層標志角蛋白。有研究發(fā)現(xiàn)K5在腭突發(fā)育的過程中在腭突上皮細胞中有特異性表達。目前國內(nèi)有關于K5在腭突的表達的研究的報道很少。 本次實驗中，應用穩(wěn)定的腭裂畸形的動物模型體系等，通過觀測EGF和K5在腭突中的表達情況，通過研究RA對EGF與K5在小鼠腭突的表達變化來探索唇腭裂畸形的發(fā)病機制以及為以后

5、的實驗及臨床提供實驗依據(jù)。 方法： 利用已建立的RA誘導的腭裂小鼠模型，用免疫組織化學技術檢測EGF及K5在GD14d、GD15d及GD16d的對照組和實驗組小鼠腭突中在蛋白水平的表達和分布變化(Gestation day，GD)。 結(jié)果： 1．在GD14-GD15的對照組小鼠腭突發(fā)育過程中，在MEE細胞發(fā)育中，EGF始終有表達，直至雙側(cè)腭突融合而MEE細胞發(fā)生細胞凋亡，EGF在GD15水平融合期的MEE

6、細胞中表達開始下降；GD14與GD16口腔側(cè)上皮強于鼻腔側(cè)上皮；在EPM細胞發(fā)育中，EGF始終有表達，在GD15時，EPM中EGF的表達開始下降。 2．實驗組中，在GD15時，MEE細胞中EGF表達增強并高于對照組。在GD14時，EPM中EGF表達減弱。 3．在GD14-GD15的對照組小鼠腭突發(fā)育過程中，在MEE細胞發(fā)育中，K5始終有表達，直至雙側(cè)腭突融合而MEE細胞發(fā)生細胞凋亡，K5在GD15水平融合期的MEE細胞中

7、表達上升。 4.實驗組中，在GD14-GD15時，MEE中K5的表達強于對照組并且在這兩個時期，K5的表達程度沒有發(fā)生變化。 結(jié)論： 1．在水平融合期(GD15)，實驗組中EGF的表達發(fā)生上調(diào)，可能促進MEE細胞的異常增殖進而妨礙了MEE細胞的分化和轉(zhuǎn)歸，進而誘發(fā)腭裂。 2．在接觸融合期(GD15)，K5在正常對照組MEE細胞中表達水平上調(diào)，而在未發(fā)生接觸融合的實驗組MEE細胞中K5水平未見上調(diào)，提示K5