PAI2基因重組腺病毒的構(gòu)建及抗腫瘤研究.pdf

1、惡性腫瘤嚴(yán)重危害人類(lèi)的生命健康，當(dāng)傳統(tǒng)的治療方法如手術(shù)、化療、放療等，對(duì)很多中晚期腫瘤患者束手無(wú)策時(shí),基因治療顯示出了很好的優(yōu)勢(shì)。腺病毒載體是目前基因治療中最有前景的一種病毒載體。我們利用腺病毒為載體，并對(duì)其進(jìn)行改造，使其只在腫瘤細(xì)胞中復(fù)制、增殖，而對(duì)正常細(xì)胞沒(méi)有影響，同時(shí)攜帶治療基因，隨著病毒在腫瘤細(xì)胞中的復(fù)制，基因也能特異性的表達(dá)，起到雙重治療腫瘤的作用，即靶向基因-病毒治療。
　　 端粒酶是目前已知的最為廣譜的腫瘤標(biāo)志物之

2、一，因此本研究中利用人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶啟動(dòng)子（hTERTp）調(diào)控腺病毒E1A基因表達(dá)，構(gòu)建了特異性增殖腺病毒載體pAdSU，并克隆了人纖溶酶原激活劑抑制劑2（PAI2）基因，將其插入pAdSU 構(gòu)建了增殖型腺病毒穿梭載體pAdSu-PAI2。通過(guò)與腺病毒骨架質(zhì)粒同源重組的方法獲得腺病毒AdSu-PAI2。經(jīng)PCR 鑒定病毒包裝正確后感染細(xì)胞，Western blot 檢測(cè)腺病毒AdSu-PAI2的E1A和PAI2基因的表達(dá)，結(jié)果顯示病毒感

3、染3d 后腺病毒的E1A基因在端粒酶陽(yáng)性的細(xì)胞中有表達(dá)，而在端粒酶陰性的細(xì)胞中沒(méi)有表達(dá)，PAI2基因的表達(dá)水平有明顯的增強(qiáng)，證實(shí)了所構(gòu)建的溶瘤腺病毒AdSu-PAI2 可靶向性地在腫瘤細(xì)胞中復(fù)制、增殖，對(duì)正常細(xì)胞沒(méi)有明顯影響，而且可以特異性的表達(dá)PAI2 蛋白。MTT 實(shí)驗(yàn)通過(guò)比較病毒對(duì)肝癌細(xì)胞株BEL-7402和BJ 成纖維細(xì)胞株殺傷作用，發(fā)現(xiàn)其對(duì)腫瘤細(xì)胞有較強(qiáng)的殺傷作用，而對(duì)正常細(xì)胞殺傷作用很弱，反映出了AdSu-PAI2的選擇殺傷