變形鏈球菌SBR制備及免疫小鼠后機(jī)體抗體應(yīng)答和局部細(xì)胞因子表達(dá)變化.pdf

1、原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明:所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中己經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的科研成果。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。論文作者簽名:日期:關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解山東大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和

2、借閱本人授權(quán)山東大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。(保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定)論文作者簽名導(dǎo)師簽名日期:山東大學(xué)碩士學(xué)位論文第一部分:變形鏈球菌唾液結(jié)合區(qū)段(SBR)原核表達(dá)載體構(gòu)建及亞單位疫苗SBR制備方法:1.根據(jù)變形鏈球菌SBRcDNA序列，設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物，5’端和3端分別含有限制性內(nèi)切酶Ncol和Xhol的酶切位點(diǎn)，利用PCR技術(shù)由pcD

3、NA3.1SBR擴(kuò)增能夠編碼SBR的DNA片段2.純化回收PCR產(chǎn)物，通過(guò)TA克隆技術(shù)將目的DNA片段連接至克隆載體pMD18T3.重組的pMD18T在大腸桿菌DH5。內(nèi)擴(kuò)增后，經(jīng)質(zhì)粒DNA提取、Ncol和】hol酶切鑒定，篩選出陽(yáng)性重組子4.瓊脂糖凝膠電泳回收含有SBR的DNA酶切片斷，然后在T4DNA連接酶作用下將其與pTriEx4大片段連接，構(gòu)建出閱讀框架正確的原核表達(dá)載體pTriEx4SBR:轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5.Ncol和Xho

4、l酶切鑒定篩選出陽(yáng)性重組子，并進(jìn)行基因測(cè)序鑒定5.將構(gòu)建的表達(dá)載體pTriEx4SBR轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109(DE3)中并誘導(dǎo)表達(dá)SBR融合蛋白6.運(yùn)用親和層析的原理應(yīng)用HisTrapTM蛋白純化試劑盒純化出融合蛋白SBR.結(jié)果:l.通過(guò)對(duì)重組質(zhì)粒pTriEx4SBR進(jìn)行酶切鑒定以及DNA序列測(cè)定分析，證明原核表達(dá)重組質(zhì)粒pTriEx4SBR構(gòu)建成功、開放閱讀框架正確2.SDSPAGE電泳表明在大腸桿菌JM109(DE3)中誘導(dǎo)表達(dá)的蛋