變形鏈球菌SBR制備及免疫小鼠后機體抗體應答和局部細胞因子表達變化.pdf

1、原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明:所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究所取得的成果。除文中己經注明引用的內容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本聲明的法律責任由本人承擔。論文作者簽名:日期:關于學位論文使用授權的聲明本人完全了解山東大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留或向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和

2、借閱本人授權山東大學可以將本學位論文的全部或部分內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文和匯編本學位論文。(保密論文在解密后應遵守此規(guī)定)論文作者簽名導師簽名日期:山東大學碩士學位論文第一部分:變形鏈球菌唾液結合區(qū)段(SBR)原核表達載體構建及亞單位疫苗SBR制備方法:1.根據(jù)變形鏈球菌SBRcDNA序列，設計一對特異性引物，5’端和3端分別含有限制性內切酶Ncol和Xhol的酶切位點，利用PCR技術由pcD

3、NA3.1SBR擴增能夠編碼SBR的DNA片段2.純化回收PCR產物，通過TA克隆技術將目的DNA片段連接至克隆載體pMD18T3.重組的pMD18T在大腸桿菌DH5。內擴增后，經質粒DNA提取、Ncol和】hol酶切鑒定，篩選出陽性重組子4.瓊脂糖凝膠電泳回收含有SBR的DNA酶切片斷，然后在T4DNA連接酶作用下將其與pTriEx4大片段連接，構建出閱讀框架正確的原核表達載體pTriEx4SBR:轉化大腸桿菌DH5.Ncol和Xho

4、l酶切鑒定篩選出陽性重組子，并進行基因測序鑒定5.將構建的表達載體pTriEx4SBR轉化大腸桿菌JM109(DE3)中并誘導表達SBR融合蛋白6.運用親和層析的原理應用HisTrapTM蛋白純化試劑盒純化出融合蛋白SBR.結果:l.通過對重組質粒pTriEx4SBR進行酶切鑒定以及DNA序列測定分析，證明原核表達重組質粒pTriEx4SBR構建成功、開放閱讀框架正確2.SDSPAGE電泳表明在大腸桿菌JM109(DE3)中誘導表達的蛋