脂質體生存素（survivin）反義基因治療抑制人胃癌細胞的實驗研究.pdf

1、目的探討脂質體生存素(survivin)反義寡核苷酸轉染對人胃癌細胞系HS-746T的抑制作用及其機理.方法設計合成survivin反義寡核苷酸(ASODN)轉染胃癌HS-746T細胞.分為空白對照組;脂質體轉染組,正義鏈轉染組,100、200和400nmol/L反義鏈轉染組.光鏡及透射電鏡觀察轉染前后的細胞超微結構,用流質細胞術檢測轉染后2、4、8、12、24、48h各組細胞增殖和凋亡指數(AI),采用四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測s

2、urvivin ASODN對細胞增殖能力及細胞生長的影響,繪制細胞生長曲線,計算生長抑制率(IR).逆轉錄聚合酶鏈反應技術(RT-PCR)、Western blot蛋白免疫印跡法檢測各對照組及ASODN組轉染后survivin基因轉錄、蛋白表達的變化.目的探討脂質體生存素(survivin反義寡核苷酸(ASODN)對人胃癌裸鼠皮下移植瘤的生長抑制作用及機理.方法將24只裸鼠建立人胃癌HS-746T皮下移植瘤模型,用不同的轉染液處理后隨機

3、分成6組.于注射后2,4,8,12,16,20日觀測裸鼠移植瘤體積,計算抑瘤率和腫瘤縮小率,觀察移植瘤細胞形態(tài)變化,免疫組化SP法檢測survivin的表達,并用逆轉錄聚合酶鏈反應技術(RT-PCR)和Western blot蛋白免疫印跡法比較治療后不同時間各組腫瘤組織中survivin mRNA和蛋白表達的變化.目的探討分裂原激活的蛋白激酶家族(MAPK)信號轉導通路與脂質體生存素(survivin)反義寡核苷酸轉染誘導人胃癌細胞系H

4、S-746T凋亡的關系.方法設計合成survivin反義寡核苷酸(ASODN)轉染胃癌HS-746T細胞,分空白對照組、脂質體和正義鏈轉染組,100、200、400nmol/L反義鏈轉染組及P38MAPK、ERKl/2抑制劑組.用流質細胞儀檢測轉染后2、4、8、12、24、48h各組細胞增殖和凋亡指數.免疫細胞化學染色法、Western blot蛋白免疫印跡法、免疫沉淀法及激酶活性測定法檢測各對照組及ASODN組轉染后P38MAPK、E