腦膠質(zhì)瘤增殖、凋亡及端粒酶反義基因治療的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文腦膠質(zhì)瘤增殖、凋亡及端粒酶反義基因治療的實(shí)驗(yàn)研究姓名：王建奇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：神經(jīng)外科學(xué)指導(dǎo)教師：張光霽2001.5.1’腦膠質(zhì)瘤增殖、凋亡及端粒酶反義基因治療的實(shí)驗(yàn)研究摘要惡性腫瘤是多岡素、多基岡的疾病，其共同的特征為：止常細(xì)胞周JJj機(jī)制破上1、，細(xì)胞火控性生長(zhǎng)和過(guò)度增殖；從凋亡角度來(lái)看，則是細(xì)胞的凋亡機(jī)制受到抑制，不能止常發(fā)揮清除惡變細(xì)胞作州的結(jié)果。腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡火衡狀況與病理惡性樣度具有明顯的相

2、關(guān)性，病理惡性科度直接關(guān)系劍臨床治療和預(yù)后。腦膠質(zhì)瘤為顱內(nèi)惡性腫瘤，約’i腦腫瘤總數(shù)的45％，且生存jlj短t術(shù)＼／后復(fù)發(fā)率平死亡率高，根治極其困難i／本實(shí)驗(yàn)研究嘗試一、觀察不同惡性級(jí)別腦膠質(zhì)瘤增殖、凋、亡的火衡情況，并建立說(shuō)明其火衡狀態(tài)的指標(biāo)一增殖／凋亡指數(shù)(proliferation／apoptosiSindexP／AI)探討其與膠質(zhì)瘤惡性程度的關(guān)系。二、端粒酶(telomerase)活性在各種人類(lèi)腫瘤中總的表達(dá)率約85％，為目前已

3、知的最廣泛，特異性最高的腫瘤標(biāo)記物。端粒酶活性的表達(dá)是細(xì)胞獲得無(wú)限制的分裂增殖的特征，端粒酶活性水平與膠質(zhì)瘤的惡性級(jí)別和預(yù)后相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)HJ“反義基岡封條”將端粒酶活性表達(dá)抑制，以觀察對(duì)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞的抑制作_Ll』。三、化療是腦膠質(zhì)瘤治療不可缺少的重要常規(guī)手段，而腫瘤細(xì)胞的耐藥性義為化療火敗的士要原岡，其中最突山的為多藥耐藥(multidrugresistance，MDR)。獲得多約耐約性的腫瘤細(xì)胞的明顯特征為mdr過(guò)渡表達(dá)了】70K

4、D的糖蛋白PgP，該蛋向位丁細(xì)胞膜上，作為能越依賴(lài)性藥物排出泵，將化療約從細(xì)胞內(nèi)泵山，使胞內(nèi)藥是檢測(cè)多藥耐藥的確切指現(xiàn)耐約，其表達(dá)科度與抗藥性成止比。岡此P“0糖蛋白的抑制可增加腫瘤細(xì)胞的化學(xué)敏感性，以相對(duì)較低的化療藥物劑苗取得較好的療效。／／7第一部分腦膠質(zhì)瘤增殖、凋亡的實(shí)驗(yàn)研究及建立增殖／凋亡指數(shù)／＼目的：觀察不同惡性級(jí)別膠質(zhì)瘤增殖、凋亡的火衡情況，并建立說(shuō)明其火衡狀態(tài)的指標(biāo)：增殖／凋亡指數(shù)，井探討其與膠質(zhì)瘤惡性科度的關(guān)系及此指標(biāo)在

5、膠質(zhì)瘤實(shí)驗(yàn)研究中的廊_lJ。方法：選取腦外傷減壓術(shù)后的1F腫瘤性腦組織8例為對(duì)照及不同惡性級(jí)別的Ii蠟包埋的腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本69例、手術(shù)腦膠質(zhì)瘤新鮮標(biāo)本26例分別行HE染色及以增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)免疫組化法平原何末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測(cè)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖平凋亡狀況經(jīng)堿性磷酸酶顯色和熒光標(biāo)記，計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)及流式細(xì)胞儀測(cè)域PCNA及TUNEL目f性細(xì)胞百分率。設(shè)定不同日l(shuí)性細(xì)胞卣分率范同分別對(duì)廊的等級(jí)序數(shù)，然后，根據(jù)每～標(biāo)本的日i性