慢性應激對大鼠血清HSP70、Corticosterone的影響及腎氣丸的干預作用.pdf

1、研究目的 慢性應激(chronicstress，CS)反應的整體適應性研究是生理學整體水平研究方法的內(nèi)容之一。當機體受到刺激時，神經(jīng)一內(nèi)分泌系統(tǒng)的主要變化為藍斑—交感—腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)及下丘腦—垂體—腎上腺皮質(zhì)軸的興奮，并伴有其他多種內(nèi)分泌激素的改變。熱休克蛋白(heatshockproteins，HSPs)是一種進化上高度保守的應激蛋白，存在于細菌到人類的各種生物中。HSP70是HSP家族中含量最豐富的一類，主要參與蛋白質(zhì)的折疊

2、、裝配、降解和修復過程，調(diào)節(jié)蛋白活性，介導蛋白轉(zhuǎn)運，維護蛋白的自穩(wěn)系統(tǒng)等。在正常情況下大多數(shù)組織細胞內(nèi)其含量很低，而當機體遭受各種生理或病理或心理應激時表達會明顯增加。在實驗一中選擇正常健康的大鼠為研究對象，不破壞其機體完整性，分別給予代表運動性生理應激的適宜游泳和具有典型身心應激特征的束縛應激及兩者復合三種慢性應激方式，并測定大鼠應激后血清HSP70及皮質(zhì)酮含量，觀察分析機體應激程度及整體性蛋白標志物HSP70在不同應激方式下的反應情

3、況，從分子蛋白水平研究適宜運動，慢性束縛以及兩者復合對機體整體性的影響。在實驗二中選擇慢性束縛為慢性應激方式對正常健康的大鼠造成慢性應激模型，并觀察中藥腎氣丸湯劑對慢性應激的干預作用。 研究方法 實驗一： 1.實驗動物：成熟雄性Wistar大鼠48只，體重(270±10)g2.實驗分組：大鼠行常規(guī)飼料喂養(yǎng)，適應一周后隨機分4組，每組12只，為對照組，游泳組，束縛組，復合組(游泳+束縛組)。 3.動物模型的

4、制備：游泳組：每天按時完成無負重適宜游泳運動，連續(xù)4周。束縛組：每天按時施以1次束縛應激，連續(xù)4周。復合組(游泳+束縛組)：應激方式和時間分別與束縛組，游泳組相同，兩種應激方式間隔30min，其次序每周輪換。 4.大鼠血清HSP70及皮質(zhì)酮的檢測：對照組飼養(yǎng)4周，各實驗組應激滿4周，于應激后24h內(nèi)斷頭取血，離心，分離血清，使用ELISA試劑盒定量檢測大鼠血清HSP70和皮質(zhì)酮的含量。 5.統(tǒng)計學方法：實驗數(shù)據(jù)采用平均數(shù)

5、±標準差(-x±s)表示。用SPSS16.0統(tǒng)計學軟件進行析因方差分析。 實驗二： 1.實驗動物：成熟雄性Wistar大鼠48只，體重(270±10)g2.實驗分組：大鼠行常規(guī)飼料喂養(yǎng)，適應一周后隨機分4組，每組12只，為對照組，束縛組，中藥組，中藥對照組。束縛組，中藥組，中藥對照組：每天按時施以1次束縛應激，連續(xù)4周。 3.實驗用藥：實驗所用中藥復方選用《金匱要略》中的腎氣丸湯劑，實驗所用中藥對照為單味甘草煎煮

6、湯劑。 4.中藥灌胃：自應激第3周(即第15天)開始，中藥組，中藥對照組于每天應激前1h分別灌服腎氣丸湯劑及單味甘草煎煮湯劑Sml，連續(xù)2周。 5.大鼠血清HSP70及皮質(zhì)酮的檢測：對照組飼養(yǎng)4周，各實驗組應激滿4周，于應激后24h內(nèi)斷頭取血，離心，分離血清，使用ELISA試劑盒定量檢測大鼠血清HSP70和皮質(zhì)酮的含量。 6.統(tǒng)計學方法：實驗數(shù)據(jù)采用平均數(shù)±標準差(x±s)表示。用SPSS16.0統(tǒng)計學軟件進行隨

7、機分組方差分析。 研究結(jié)果 1.實驗一：與對照組比較，各實驗組大鼠血清HSP70含量及皮質(zhì)酮含量均升高且有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，游泳與束縛兩個條件有交互作用；各實驗組兩兩之間大鼠血清HSP70含量及皮質(zhì)酮含量有差異且有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 2.實驗二：與對照組比較，束縛組與中藥對照組大鼠血清HSP70含量及皮質(zhì)酮含量均升高且有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，中藥組大鼠血清HSP70含量及皮質(zhì)酮含量差異無