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文檔簡介
1、目的:肝細(xì)胞癌(HCC)是世界上最常見的惡性腫瘤之一。在我國居腫瘤發(fā)病率第三位及惡性腫瘤死亡率第二位,生存率低,復(fù)發(fā)率高,早期發(fā)現(xiàn)及早期診斷成為治療的關(guān)鍵。激光捕獲顯微切割(LCM)與基因芯片是后基因組時代新出現(xiàn)的兩種技術(shù)。前者能在顯微鏡直視下捕獲單一細(xì)胞或細(xì)胞群,成功避免組織異質(zhì)性對檢測的干擾;后者直接快速檢測微量RNA,可同時對成千上萬基因進(jìn)行監(jiān)測,為差異表達(dá)基因的篩選提供強(qiáng)有力的工具。本研究聯(lián)用上述兩種技術(shù),構(gòu)建純化HCC組織和正
2、常肝組織基因表達(dá)譜,篩選HCC發(fā)病相關(guān)基因。 方法:對4例單發(fā)、無轉(zhuǎn)移的HCC患者標(biāo)本先行LCM獲取純凈肝癌細(xì)胞和正常肝細(xì)胞,并分別提取微量RNA,采用Agilent2100 Bioanalyzer進(jìn)行微量RNA質(zhì)量鑒定。對質(zhì)檢合格的微量RNA進(jìn)行線性擴(kuò)增及cy3、cy5雙色熒光標(biāo)記后,再與Agilent human4*44K基因芯片雜交。芯片經(jīng)洗滌、掃描后,以Feature Extraction軟件對cy3和cy5進(jìn)行Norm
3、alize標(biāo)準(zhǔn)化處理,進(jìn)而篩選出與HCC發(fā)病相關(guān)的候選差異表達(dá)基因。統(tǒng)計在所有樣本中共同上調(diào)和共同下調(diào)的基因,對篩選出來基因依次進(jìn)行排序和分類,探討表達(dá)顯著上調(diào)及下調(diào)的前十位候選差異表達(dá)基因與HCC的關(guān)系。 結(jié)果:在4對樣本基因表達(dá)譜中,純化肝癌與正常肝組織共同差異表達(dá)的基因有1361條,上調(diào)基因607條,下調(diào)基因754條。在前10位極顯著上調(diào)和下調(diào)的差異表達(dá)基因(即共20條)中,對照文獻(xiàn),6條為HCC已知差異表達(dá)基因,10條表
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