聯(lián)用激光顯微切割與基因芯片技術(shù)篩選肝細(xì)胞癌差異表達(dá)基因.pdf

1、目的：肝細(xì)胞癌（HCC）是世界上最常見的惡性腫瘤之一。在我國居腫瘤發(fā)病率第三位及惡性腫瘤死亡率第二位，生存率低，復(fù)發(fā)率高，早期發(fā)現(xiàn)及早期診斷成為治療的關(guān)鍵。激光捕獲顯微切割（LCM）與基因芯片是后基因組時代新出現(xiàn)的兩種技術(shù)。前者能在顯微鏡直視下捕獲單一細(xì)胞或細(xì)胞群，成功避免組織異質(zhì)性對檢測的干擾；后者直接快速檢測微量RNA，可同時對成千上萬基因進(jìn)行監(jiān)測，為差異表達(dá)基因的篩選提供強有力的工具。本研究聯(lián)用上述兩種技術(shù)，構(gòu)建純化HCC組織和正

2、常肝組織基因表達(dá)譜，篩選HCC發(fā)病相關(guān)基因。 方法：對4例單發(fā)、無轉(zhuǎn)移的HCC患者標(biāo)本先行LCM獲取純凈肝癌細(xì)胞和正常肝細(xì)胞，并分別提取微量RNA，采用Agilent2100 Bioanalyzer進(jìn)行微量RNA質(zhì)量鑒定。對質(zhì)檢合格的微量RNA進(jìn)行線性擴增及cy3、cy5雙色熒光標(biāo)記后，再與Agilent human4*44K基因芯片雜交。芯片經(jīng)洗滌、掃描后，以Feature Extraction軟件對cy3和cy5進(jìn)行Norm

3、alize標(biāo)準(zhǔn)化處理，進(jìn)而篩選出與HCC發(fā)病相關(guān)的候選差異表達(dá)基因。統(tǒng)計在所有樣本中共同上調(diào)和共同下調(diào)的基因，對篩選出來基因依次進(jìn)行排序和分類，探討表達(dá)顯著上調(diào)及下調(diào)的前十位候選差異表達(dá)基因與HCC的關(guān)系。 結(jié)果：在4對樣本基因表達(dá)譜中，純化肝癌與正常肝組織共同差異表達(dá)的基因有1361條，上調(diào)基因607條，下調(diào)基因754條。在前10位極顯著上調(diào)和下調(diào)的差異表達(dá)基因（即共20條）中，對照文獻(xiàn)，6條為HCC已知差異表達(dá)基因，10條表