

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、目的:本研究采用寡核苷酸探針基因芯片技術(shù),結(jié)合腫瘤細(xì)胞原代培養(yǎng)技術(shù),研究鼻咽癌基因表達(dá)譜差異基因,并對鼻咽癌的發(fā)病機制進(jìn)行初步探討。為鼻咽癌的早期診斷、預(yù)后判斷及治療方案的選擇提供理論依據(jù)。 方法:取鼻咽癌和鼻咽慢性炎癥的新鮮組織進(jìn)行原代培養(yǎng),對所獲得的細(xì)胞分別用細(xì)胞角蛋白(CK)免疫細(xì)胞化學(xué)、EBER1原位雜交、EBV-DNA熒光定量PCR等方法驗證。抽提細(xì)胞總RNA,逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,經(jīng)雙色熒光標(biāo)記后和人全基因表達(dá)譜芯片雜交
2、,構(gòu)建鼻咽癌原代細(xì)胞的全基因表達(dá)譜,利用生物信息學(xué)技術(shù)分析數(shù)據(jù),確定鼻咽癌差異表達(dá)基因。 結(jié)果:1鼻咽癌細(xì)胞差異表達(dá)基因篩選①經(jīng)原代培養(yǎng)后獲得5例鼻咽癌細(xì)胞和3鼻咽正常上皮細(xì)胞,上述原代細(xì)胞及鼻咽癌細(xì)胞株C666的總RNA提取和質(zhì)檢結(jié)果理想。6組芯片雜交結(jié)果顯示,所有陽性對照(管家基因)的雜交信號清晰,陰性對照的雜交信號很低,提示芯片雜交效果良好。 ②根據(jù)顯著性差異標(biāo)準(zhǔn)(ratio>2,為基因表達(dá)上調(diào);ratio<0.5
3、,為基因表達(dá)下調(diào)),四例以上共同表達(dá)的差異基因有493個,包括上調(diào)基因264個,下調(diào)基因229個。對其中四例(NPC31、NPC43、NPC47和C666,經(jīng)聚類分析表達(dá)譜相似的)鼻咽癌細(xì)胞進(jìn)行初步篩選,其中3例以上符合上述標(biāo)準(zhǔn)的差異表達(dá)基因共有636個,包括上調(diào)基因394個,下調(diào)基因242個。該636個基因中,包括細(xì)胞周期相關(guān)基因81個;細(xì)胞粘連蛋白15個;凋亡相關(guān)基因10個;分化相關(guān)基因4個;信號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因50個;轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)基因
4、25個;代謝相關(guān)基因25個;細(xì)胞運動相關(guān)基因7個;發(fā)育相關(guān)基因34個;逆境反應(yīng)蛋白34個;細(xì)胞組織與生物發(fā)生相關(guān)基因23個等。 2熒光定量PCR驗證差異基因①表達(dá)譜芯片中篩選出的4個表達(dá)上調(diào)基因ANLN、CENPF、MCM2和CDC6,在NPC43和NPC47熒光信號值Cy3/Cy5(ratio),分別為43.8和84.4,28.4和68.7,3.1和3.4,2.5和2.9。熒光定量PCR檢測NPC43和NPC47的表達(dá)差異倍數(shù)
5、分別為25.3和77.7,12.7和71.4,7.5和4,5.1和4.9,兩種技術(shù)檢測的結(jié)果基本相符,即該4個基因在鼻咽癌原代細(xì)胞的表達(dá)比在正常細(xì)胞的表達(dá)顯著升高。同時,檢測CNE-1和SUNE-1中該4個基因的表達(dá),基因差異倍數(shù)分別為:64.9和222,187和110,2.16和2.3,7.8和2.1,與表達(dá)譜芯片檢測的該4個基因的表達(dá)趨勢相同,在鼻咽癌細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)。熒光定量PCR結(jié)果也證明了,ANLN、CENPF、MCM2和CDC
6、6在鼻咽癌的原代細(xì)胞及細(xì)胞株中表達(dá)上調(diào),為高表達(dá)基因。 ②表達(dá)譜芯片中篩選出的4個表達(dá)下調(diào)基因TGM3、NDRG1、SERPINB13和MAL,在NPC43和NPC47熒光信號值Cy3/Cy5(ratio)的倒數(shù),即正常細(xì)胞和鼻咽癌細(xì)胞的差異倍數(shù),分別為4.9和4.1,3.3和19.5,10和4.7,31.1和146.1。熒光定量PCR檢測正常細(xì)胞和鼻咽癌原代細(xì)胞NPC43和NPC47的表達(dá)差異倍數(shù)分別為13和4.3,2.5和1
7、2.4,23.9和2.6,2.2和54.4,兩種技術(shù)檢測的結(jié)果趨勢相同,即該4個基因在正常鼻咽上皮細(xì)胞的表達(dá)比在鼻咽癌原代細(xì)胞的表達(dá)顯著增高;同時,檢測CNE-1和SUNE-1中該4個基因的表達(dá),結(jié)果示:正常鼻咽上皮細(xì)胞與鼻咽癌細(xì)胞株的基因差異倍數(shù)分別為:45.8和24.4,4.8和6.4,65.4和2.3,12.5和10.1,與表達(dá)譜芯片檢測的該4個基因的表達(dá)趨勢相同,在鼻咽癌細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)。熒光定量PCR結(jié)果也證明了,TGM3、ND
8、RG1、SERPINB13和MAL在鼻咽癌的原代細(xì)胞及細(xì)胞株中表達(dá)下調(diào),為低表達(dá)基因。 3免疫組織化學(xué)染色驗證差異基因的表達(dá)MCM2和CDC6在鼻咽癌組織中存在表達(dá),陽性細(xì)胞表達(dá)分別定位于腫瘤細(xì)胞胞核和腫瘤細(xì)胞的胞漿及胞膜。對50例鼻咽癌組織和20例鼻咽慢性炎癥組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)分析,其中,MCM2在鼻咽癌組織和慢性炎癥組織中的陽性率分別為94%(47/50)和60%(12/20);CDC6在鼻咽癌組織和慢性炎癥組織中的陽性率
9、分別為90%(45/50)和45%(7/20)。兩種組織中的表達(dá)存在顯著性差異(P<0.001),即MCM2和CDC6在鼻咽癌組織中均為高表達(dá)。 結(jié)論:1鼻咽癌細(xì)胞存在廣泛的差異表達(dá)基因,這些基因包括細(xì)胞周期相關(guān)基因、細(xì)胞粘連蛋白、凋亡相關(guān)基因、分化相關(guān)基因、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因、轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)、代謝相關(guān)基因、細(xì)胞運動相關(guān)基因、發(fā)育相關(guān)基因、逆境反應(yīng)蛋白、細(xì)胞組織與生物發(fā)生相關(guān)基因等。 2鼻咽癌細(xì)胞中ANLN、CENPF、MC
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 基于基因芯片的鼻咽癌研究.pdf
- 聯(lián)用激光顯微切割與基因芯片技術(shù)篩選肝細(xì)胞癌差異表達(dá)基因.pdf
- 胃癌基因芯片差異表達(dá)基因的驗證和篩選.pdf
- 從基因芯片結(jié)果中篩選鼻咽癌信號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因及初步驗證.pdf
- 通過基因芯片技術(shù)篩選肝癌差異表達(dá)基因的初步研究.pdf
- 基因芯片技術(shù)篩選不同發(fā)育階段人表皮干細(xì)胞差異表達(dá)基因的研究.pdf
- 利用基因芯片技術(shù)篩選早期乳腺癌的差異表達(dá)基因.pdf
- 基因芯片篩選卵巢癌紫杉醇耐藥差異表達(dá)基因的研究.pdf
- 基因芯片技術(shù)用于鼻咽癌及其放療敏感性的研究.pdf
- 利用基因芯片篩選乳腺癌相關(guān)差異表達(dá)基因.pdf
- 鼻咽癌差異表達(dá)microRNAs篩選研究.pdf
- 肝細(xì)胞癌SuperArray腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因芯片篩選及Cathepsin L表達(dá)實驗研究.pdf
- 應(yīng)用基因芯片篩選膽管癌相關(guān)差異表達(dá)基因及對其功能的研究.pdf
- 腫瘤表達(dá)譜基因芯片篩選膽囊癌腫瘤相關(guān)基因的研究.pdf
- 基因芯片篩選GJB6突變體的差異表達(dá)基因.pdf
- 基因芯片篩選骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與軟骨細(xì)胞的差異表達(dá)基因.pdf
- 應(yīng)用基因芯片篩選莫尼茨絳蟲種間差異表達(dá)基因.pdf
- 基因芯片篩選人腦創(chuàng)傷皮層差異表達(dá)基因的實驗研究.pdf
- 基因芯片分析EB病毒LMP1誘導(dǎo)鼻咽癌干細(xì)胞增殖的機制.pdf
- 胃癌基因芯片的差異表達(dá)基因研究.pdf
評論
0/150
提交評論