磺酸基(SP)陽離子交換介質(zhì)的制備及其對重組人乳鐵蛋白的純化.pdf

1、乳鐵蛋白(Lactoferrin，LF)是一種高附加值的藥用蛋白質(zhì)，人乳中含量較高，但因人乳來源有限，嚴(yán)重限制了其商業(yè)化應(yīng)用。隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)的突飛猛進(jìn)，LF已經(jīng)在重組牛乳腺生物反應(yīng)器中得到了高效表達(dá)。為了有效地利用該重組蛋白，本文首先采用進(jìn)口SP離子交換介質(zhì)為層析介質(zhì)，建立了乳腺生物反應(yīng)器表達(dá)的重組人乳鐵蛋白分離純化的規(guī)?；a(chǎn)工藝，分離純化工藝由牛奶預(yù)處理(Milkpretreatment)、離子交換層析(Ion Exchange C

2、hromatography,IEC)、超濾脫鹽(Ultrafiltration desalting)、凍干(Freeze drying)等步驟組成。批次處理量為200 L重組人乳鐵蛋白牛奶，工藝所得產(chǎn)品約600 g純品重組人乳鐵蛋白，電泳及高效液相檢測純度大于95％。但是，由于本工藝采用價格高昂的進(jìn)口離子交換介質(zhì)，因此生產(chǎn)成本較高，限制了重組乳鐵蛋白的應(yīng)用。
　　 為了降低純化工藝生產(chǎn)成本，本文以國產(chǎn)的快流速瓊脂糖凝膠為基質(zhì)合成

3、了不同配基密度的SP離子交換介質(zhì)，并成功應(yīng)用于重組人乳鐵蛋白的分離純化。在瓊脂糖凝膠活化步驟中，考察了烯丙基縮水甘油醚加入量、NaBH4用量、無水Na2SO4用量、反應(yīng)時間、反應(yīng)溫度以及NaOH溶液的初始濃度等因素對介質(zhì)烯丙基密度的影響。然后以Na2S2O5的磺酸基團(tuán)為配基偶聯(lián)烯丙基活化的瓊脂糖凝膠，采用正交實驗方法考察了Na2S2O5加入量、偶聯(lián)緩沖液的pH值、反應(yīng)溫度對介質(zhì)配基密度的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，影響介質(zhì)配基密度的因素順序為pH＞

4、Na2S2O5加入量＞反應(yīng)溫度。通過反應(yīng)過程的優(yōu)化控制，可以實現(xiàn)SP離子交換介質(zhì)上配基密度的控制并得到了高配基密度(0.24mmol/mL)的SP離子交換介質(zhì)。
　　 最后，本文考察了研制的SP離子交換介質(zhì)制備工藝的重現(xiàn)性、使用過程中介質(zhì)的吸附性能。結(jié)果表明，自制介質(zhì)合成工藝穩(wěn)定、重復(fù)使用性與不同批次間的重現(xiàn)性較好，靜態(tài)、動態(tài)吸附性能良好，不同配基密度的SP離子交換介質(zhì)均可用于純化出重組人乳鐵蛋白。其中高配基密度(0.24 mm