中藥復(fù)方GM治療骨質(zhì)疏松癥的實(shí)驗(yàn)研究及其機(jī)制初探.pdf

1、骨質(zhì)疏松是一種以全身性骨量減少和骨組織微細(xì)結(jié)構(gòu)破壞為特征繼而導(dǎo)致骨脆性增加和骨折危險(xiǎn)性增高的骨骼疾病，與機(jī)體骨吸收和骨形成這一對(duì)矛盾體失衡有關(guān)，造成這種失衡的原因，則與全身性多環(huán)節(jié)紊亂有關(guān)，是一種增齡性退行性改變?cè)诠趋老到y(tǒng)的反應(yīng)。 GM 是以嶺醫(yī)藥研究院正在研發(fā)的一個(gè)治療骨質(zhì)疏松癥的中藥復(fù)方制劑，主要藥物組成為淫羊藿、菟絲子等。實(shí)驗(yàn)通過(guò)去除雙側(cè)卵巢制備大鼠骨質(zhì)疏松模型，模擬臨床絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松，觀察GM對(duì)骨質(zhì)疏松的治療作用，并對(duì)其

2、作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。 目的： 采用雙側(cè)卵巢切除致大鼠骨質(zhì)疏松(OVX)的動(dòng)物模型，觀察GM對(duì)OVX大鼠體重、子宮、肝腎功能、骨形態(tài)計(jì)量學(xué)指標(biāo)、骨密度、骨生物力學(xué)等指標(biāo)的影響，探討其對(duì)OVX大鼠骨質(zhì)疏松的作用及可能的機(jī)制，為本制劑的研發(fā)與臨床應(yīng)用提供參考依據(jù)。 方法： 將85只四月齡SD雌性大鼠按體重隨機(jī)分為6組。假手術(shù)組(Sham)10只；模型組(OVX)、己烯雌酚組(DES)、GM低劑量組(GML)、

3、GM中劑量組(GMM)、GM高劑量組(GMH)各15只。除假手術(shù)組外，其余行雙側(cè)卵巢切除術(shù)。假手術(shù)組和模型組給溶劑對(duì)照。所有動(dòng)物均在手術(shù)后第二天開(kāi)始灌胃給藥，每天一次，連續(xù)90天。OVX組與Sham組灌胃0.5％CMC-Na，DES組灌胃己烯雌酚25μg/kg·d，GM低、中、高劑量組分別按1.92g生藥/kg·d、3.84 g生藥/kg·d、7.68 g 生藥/kg·d灌胃。所有大鼠在處死前第18d和第3d分別腹腔注射鹽酸四環(huán)素30m

4、g/kg進(jìn)行熒光標(biāo)記。大鼠麻醉后取血，測(cè)定血清鈣(Ca)、磷(P)、堿性磷酸酶(ALP)、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)、雌二醇(E2)、骨鈣素(BGP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(StrACP)；取子宮、肝、脾、腎、腎上腺、胸腺器官稱濕重，計(jì)算其重量指數(shù)，10％甲醛溶液組織固定，石蠟包埋，切片，常規(guī)HE染色，觀察各器官組織形態(tài)學(xué)變化并測(cè)量子宮內(nèi)膜厚度。處死后取左側(cè)脛骨上段進(jìn)行不脫鈣

5、骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)分析；取左側(cè)股骨測(cè)定骨密度(BMD)；取右側(cè)股骨及第五腰椎進(jìn)行生物力學(xué)分析。 結(jié)果： 1.GM對(duì)OVX大鼠體重的影響： 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始第0周、2周、4周、6周、8周、10周、12周體重變化趨勢(shì)顯示，OVX大鼠體重增長(zhǎng)迅速，而GM可以有效降低OVX大鼠體重。 2.GM對(duì)OVX大鼠肝腎功能的影響： 各組與OVX組比較，血清ALP、AST、ALT、BUN、CRE無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 3.

6、GM對(duì)OVX大鼠臟器指數(shù)、組織形態(tài)學(xué)的影響： GM三個(gè)劑量組與OVX組比，肝、脾、腎、腎上腺、胸腺臟器指數(shù)無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；各組組織形態(tài)學(xué)觀察無(wú)異常。 4.GM對(duì)OVX大鼠骨代謝的影響： OVX組BGP明顯升高，為1.37±0.34ng/ml，DES組為0.91±0.18ng/ml、GM低劑量組為1.02±0.15ng/ml，以上兩組與均能明顯降低BGP含量(p<0.01或p<0.05)。OVX組StrACP活性

7、明顯升高為12.84±2.62U/L，DES組為8.42±2.59U/L，GML組為3.16±1.20 U/L、GMM組為4.43±2.54U/L、GMH組為8.55±0.76U/L，各組均能顯著降低StrACP活性(p<0.01或p<0.05)。 5.GM對(duì)OVX大鼠左側(cè)脛骨骨形態(tài)計(jì)量學(xué)的影響： 大鼠切除卵巢后，作為骨量主要標(biāo)志的脛骨TBV％(骨小梁體積百分比)顯著降低，而代表骨吸收參數(shù)的TRS％(骨小梁吸收表面百分比

8、)以及代表骨形成參數(shù)的TFS％(骨小梁形成表面百分比)、AFS％(活性生成表面百分比)、MAR(骨小梁礦化率)、MOSW(類骨質(zhì)平均寬度)、mAR(骨皮質(zhì)礦化率)皆顯著增高(p<0.01)，表明卵巢切除所造成的是一種骨吸收大于骨形成的高轉(zhuǎn)換型骨質(zhì)疏松模型，這與國(guó)內(nèi)外的報(bào)道相一致。陽(yáng)性藥物與模型組比較骨形態(tài)學(xué)計(jì)量學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)均有非常顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.01)，說(shuō)明陽(yáng)性藥物己烯雌酚對(duì)去卵巢大鼠所致骨質(zhì)疏松有治療作用。GM各治療組與模型組

9、比較骨形態(tài)學(xué)計(jì)量學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)顯示其對(duì)卵巢切除所致的骨質(zhì)疏松癥具有治療作用，尤以低劑量組明顯(p<0.01或p<0.05)。 6.GM對(duì)OVX大鼠骨密度的作用： 大鼠左側(cè)股骨骨密度結(jié)果顯示，OVX大鼠骨密度降低，為0.380±0.014g/cm2。GML組、GMM組與之相比骨密度明顯升高(P＜0.05)，分別為0.400±0.012 g/cm2、0.399±0.021g/cm2。 7.GM對(duì)OVX大鼠右側(cè)股骨及第五腰

10、椎骨生物力學(xué)的影響： OVX組大鼠右側(cè)股骨最大載荷為82.58±17.71 牛頓，Sham組為102.54±12.67牛頓，兩組相比有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)；DES組最大載荷為98.35±12.35牛頓，GML組為101.78±6.72牛頓、GMH組為97.51±15.29牛頓，與OVX組相比最大載荷明顯升高(P＜0.05)；而抗彎強(qiáng)度、彈性載荷、最大撓度各組間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但數(shù)據(jù)趨勢(shì)顯示出了GM對(duì)以上骨生物力學(xué)各項(xiàng)

11、指標(biāo)的改善作用。從第五腰椎所能承受的最大壓縮力來(lái)看，OVX大鼠腰椎的最大壓縮力最低(343.37±83.18牛頓)，與Sham組(444.41±65.85牛頓)比較有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，GML組(447.34±53.47牛頓)和GMH組(425.77±90.62牛頓)可明顯提高最大壓縮力(P＜0.05)。 8.GM對(duì)OVX大鼠雌激素水平與子宮的影響： 子宮臟器指數(shù)結(jié)果顯示，Sham組(01.28+0.13)、

12、DES組(0.30±0.07)、GML組(0.16±0.12)、GMH組(0.14±0.14)與模型組(0.09±0.09)相比有顯著差異(P＜0.01或P＜0.05)。OVX組子宮內(nèi)膜變薄，子宮內(nèi)膜平均厚度為5.2±1.91μm，Sham組(8.1±1.91μm)、DES組(8.7±1.7μm)與之相比P＜0.01。GMH組(4.6±2.7μm)、GMM組(4.7±2.1μm)、GML組(6.0±3.1μm)與模型組子宮內(nèi)膜厚度沒(méi)有明