三氧化二砷誘導(dǎo)雞MD腫瘤細(xì)胞凋亡機(jī)理的研究.pdf

1、雞馬立克氏病(Marek'sdisease，MD)是一種由馬立克氏病病毒(MDV)引起的以淋巴細(xì)胞增生為病變特征的腫瘤性疾病，由于超強(qiáng)毒株不斷出現(xiàn)，使傳統(tǒng)疫苗不能起到很好的保護(hù)作用，在長(zhǎng)期使用HVT疫苗預(yù)防MD的過程中，國(guó)內(nèi)外均有關(guān)于免疫失敗的報(bào)道，給本病的控制和消滅帶來了巨大的困難。而且雞MD的許多特性與哺乳動(dòng)物腫瘤的發(fā)生有相似之處，被作為研究腫瘤性疾病的良好模型。三氧化二砷(As2O3)首先被用于急性早幼粒細(xì)胞白血病(APL)治療，

2、現(xiàn)已經(jīng)引申到實(shí)體瘤的治療上，由此推動(dòng)了對(duì)其抗腫瘤機(jī)制的研究。目前關(guān)于As2O3抗MD腫瘤機(jī)制的研究還很少，本課題選擇MDCC-MSB1細(xì)胞系為試驗(yàn)對(duì)象，通過對(duì)細(xì)胞凋亡相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)，進(jìn)而探討其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制，為臨床應(yīng)用As2O3治療MD及其他腫瘤性疾病提供理論依據(jù)。研究結(jié)果表明： 1.采用四唑藍(lán)快速比色法(MTT法)觀察As2O3對(duì)MDCC-MSB1細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用，結(jié)果表明各濃度組As2O3均可以抑制MDCC-MSB1細(xì)

3、胞增殖，且抑制率具有劑量依賴性。 2.倒置顯微鏡下觀察MDCC-MSB1細(xì)胞生長(zhǎng)情況；吖啶橙/溴化乙錠(AO/EB)雙熒光染色熒光顯微鏡下觀察不同濃度下As2O3誘導(dǎo)MDCC-MSB1細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果表明As2O3誘導(dǎo)MDCC-MSB1細(xì)胞凋亡，且凋亡率具有劑量依賴性。 3.應(yīng)用Rhodamine123染色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)法檢測(cè)△ψm變化，結(jié)果表明As2O3可通過引起MDCC-MSB1細(xì)胞△ψm降低而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡

4、。 4.RT-PCR方法檢測(cè)MDCC-MSB1細(xì)胞Caspase3mRNA表達(dá)水平；Caspase3比色檢測(cè)試劑盒，應(yīng)用酶標(biāo)儀檢測(cè)Caspase3活性的變化，結(jié)果表明Caspase3活性增加是As2O3引起MDCC-MSB1細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵因素。 5.應(yīng)用Fura-2/AM熒光法和RT-PCR方法分別檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]i的變化和CaMmRNA表達(dá)水平，結(jié)果表明As2O3可通過引起MDCC-MSB1細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]i增

5、加，鈣穩(wěn)態(tài)失衡機(jī)制而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。 6.RT-PCR方法檢測(cè)MDCC-MSB1細(xì)胞Fas表達(dá)水平。結(jié)果表明As2O3可通過引起MDCC-MSB1細(xì)胞FasmRNA的表達(dá)增加而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，這可能是As2O3誘導(dǎo)MDCC-MSB1細(xì)胞凋亡的機(jī)制之一。 As2O3能抑制MDCC-MSB1細(xì)胞的生長(zhǎng)并誘導(dǎo)其凋亡。As2O3誘導(dǎo)凋亡與降低MDCC-MSB1細(xì)胞△ψm，增加細(xì)胞內(nèi)[Ca2]i，Caspase3mRNA表達(dá)Caspa