Rab23在皮膚鱗狀細(xì)胞癌侵襲中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、皮膚鱗狀細(xì)胞癌（cutaneoussquamouscellcarcinoma,cSCC）是皮膚的第二常見腫瘤，發(fā)生率僅次于基底細(xì)胞癌（basalcellcarcinoma,BCC）。它是一種侵襲性癌，可早期轉(zhuǎn)移。因此，關(guān)于鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展及其侵襲、轉(zhuǎn)移的研究一直是皮膚科學(xué)界關(guān)注的重點(diǎn)領(lǐng)域之一。
　　Rab23是RAS原癌基因成員，其編碼的蛋白是小GTP酶超家族Rab家族成員，其突變可引起小鼠開腦綜合征（openbrainsyn

2、drome）。它參與囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)，是sonichedgehog信號(hào)通路的負(fù)調(diào)控因子，并在不同腫瘤中發(fā)揮不同作用。課題組曾發(fā)現(xiàn)Rab23在皮膚鱗癌中高表達(dá)，但目前尚未見Rab23在皮膚鱗癌侵襲中的作用及機(jī)制的研究。本研究通過免疫組化檢測Rab23在光線性角化病、鮑溫病、皮膚鱗癌和正常皮膚中的表達(dá)，分析其與鱗癌侵襲的相關(guān)性，檢測Rab23在鱗癌細(xì)胞系中的表達(dá)，研究Rab23對(duì)鱗癌細(xì)胞侵襲的影響，并初步探討機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　

3、①免疫組化檢測Rab23在光線性角化病、鮑溫病、皮膚鱗狀細(xì)胞癌及正常皮膚中的表達(dá)，統(tǒng)計(jì)分析Rab23在各組中的表達(dá)差異，及Rab23陽性表達(dá)與皮膚鱗癌臨床病理特征的相關(guān)性；②Westernblotting檢測Rab23在HSC-2、HSQ-89、Sa-3、Tca四個(gè)鱗癌細(xì)胞系及Hacat中的表達(dá)；③Transwell小室檢測Rab23對(duì)鱗癌細(xì)胞侵襲能力的影響；④細(xì)胞劃痕試驗(yàn)檢測Rab23對(duì)鱗癌細(xì)胞遷移能力的影響；⑤RealtimeRT-

4、PCR檢測干涉或過表達(dá)Rab23后鱗癌細(xì)胞中侵襲相關(guān)分子MMP2、MMP9，hedgehog信號(hào)通路中Ptch1、Gli1、Gli2的mRNA水平；⑥Westernblotting檢測侵襲相關(guān)分子Rac1的表達(dá)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　①Rab23在皮膚鱗狀細(xì)胞癌、光線性角化病、鮑溫病及正常皮膚中的表達(dá)：Rab23在光線性角化病、鮑溫病及皮膚鱗狀細(xì)胞癌組織中均有表達(dá)，在正常皮膚中不表達(dá)，非曝光部位及中、低分化鱗癌是Rab23陽

5、性表達(dá)的危險(xiǎn)因素；
　?、赗ab23在HSC-2、HSQ-89、Sa-3、Tca四個(gè)鱗癌細(xì)胞系及Hacat中的表達(dá)：Rab23在四個(gè)鱗癌細(xì)胞系中均有表達(dá)，在HSC-2、HSQ-89細(xì)胞中高表達(dá)，在Sa-3及Tca中低表達(dá)，在Hacat中不表達(dá)；
　?、跿ranswell小室檢測Rab23對(duì)鱗癌細(xì)胞侵襲能力的影響：HSQ-89細(xì)胞行Rab23特異的siRNA干涉后，細(xì)胞侵襲能力減弱；Sa-3細(xì)胞行質(zhì)粒轉(zhuǎn)染過表達(dá)Rab23后，細(xì)

6、胞侵襲能力較對(duì)照組增強(qiáng)；
　?、芗?xì)胞劃痕試驗(yàn)檢測Rab23對(duì)鱗癌細(xì)胞遷移能力的影響：HSQ-89細(xì)胞行siRNA干涉后，干涉組與對(duì)照組細(xì)胞均僅遷移1個(gè)細(xì)胞直徑距離；Sa-3細(xì)胞行質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后，過表達(dá)組與對(duì)照組細(xì)胞遷移能力差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　?、軷ealtimeRT-PCR檢測干涉或過表達(dá)Rab23后相關(guān)分子的水平：HSQ-89細(xì)胞Rab23干涉組MMP2、MMP9、Gli2的mRNA水平較對(duì)照組低，Ptch1、Gli1的mR

7、NA水平較對(duì)照組高；Sa-3細(xì)胞Rab23過表達(dá)組中MMP2、MMP9、Gli2的mRNA水平較對(duì)照組高，Ptch1、Gli1較對(duì)照組低；
　?、轜esternblotting檢測干涉或過表達(dá)Rab23后Rac1的表達(dá)：HSQ-89細(xì)胞干涉Rab23表達(dá)后，Rac1水平較對(duì)照組低；Sa-3細(xì)胞過表達(dá)Rab23表達(dá)后，Rac1水平較對(duì)照組高。
　　主要結(jié)論：
　?、賀ab23在光線性角化病、鮑溫病及皮膚鱗癌中陽性表達(dá)，而