PPARs激動劑對THP-1巨噬細(xì)胞ABCA1表達(dá)及膽固醇流出的影響.pdf

1、動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是世界上死亡率最高的疾病之一，無論是在發(fā)展中國家還是在發(fā)達(dá)國家，主要表現(xiàn)為病變組織中膽固醇的堆積，并伴有大量泡沫細(xì)胞的形成。ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)子A1(ATP-binding cassette transporter A1，ABCA1)是一個抗AS基因，它能促進(jìn)細(xì)胞中膽固醇的流出，并抑制AS的發(fā)生發(fā)展。人的ABCA1基因定位于9q3.1，包括了50個外顯子和49個內(nèi)含子，編碼2261個氨基

2、酸殘基。它在人的許多組織都高表達(dá)，如胚胎、肝、腎上腺、肺和胎兒組織。巨噬細(xì)胞中膽固醇流入能上調(diào)它的表達(dá)，而HDL<,3>介導(dǎo)的膽固醇流出則能抑制其表達(dá)。ABCA1缺乏能導(dǎo)致丹吉爾病和家族性HDL缺乏癥，表現(xiàn)為膽固醇酯在各種組織中聚集。在脂質(zhì)負(fù)荷的巨噬細(xì)胞中ABCA1表達(dá)增高，能促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)的膽固醇流出到胞外的載脂蛋白AI或者HDL上。作為膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)過程的第一步，ABCA1的激活還能調(diào)節(jié)與AS發(fā)生關(guān)系密切的血漿HDL的濃度。 過氧

3、化物酶體增殖激活性受體(Peroxisome proliferators-activated receptors，PPARs)是一種調(diào)控脂質(zhì)和糖類代謝的核受體，包括PPAR<,α>，PPARβ(σ)和PPARγ三種亞型。PPAR<,α>在肝臟、心臟、肌肉、腎臟和動脈管壁的各種細(xì)胞如內(nèi)皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中表達(dá)較高。PPARβ表達(dá)廣泛，但是至今仍沒有發(fā)現(xiàn)有特定的配體，目前的研究很少。PPAγ高表達(dá)于白色脂肪組織、免疫系統(tǒng)和小腸中。PPARs在

4、和其配體結(jié)合后，PPARs的轉(zhuǎn)錄活性會發(fā)生改變，繼而與另一種核受體視黃醇類X受體(retinoid X receptor，RXR)結(jié)合形成異二聚體，從而作為配體激活的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)基因發(fā)揮作用。現(xiàn)有大量研究指出PPARs具有抗AS的作用。 LXRs也是核受體超家族的一員，在調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的過程中起著關(guān)鍵的作用。LXRs對細(xì)胞內(nèi)膽固醇的升高非常敏感，膽固醇濃度的升高會激活LXRs，進(jìn)而誘導(dǎo)一系列參與膽固醇吸收、流出和轉(zhuǎn)運(yùn)的基因發(fā)生表達(dá)。除

5、了參與脂質(zhì)代謝的功能，LxRs還能在巨噬細(xì)胞中調(diào)節(jié)免疫和炎癥反應(yīng)。它分為LXRα和LXRβ兩種亞型。LXRs一般與RXR生成異二聚體，識別并結(jié)合特異性DNA反應(yīng)元件而發(fā)揮作用?；虮磉_(dá)證實(shí)LXRα能調(diào)節(jié)肝臟、巨噬細(xì)胞和小腸內(nèi)膽固醇和脂肪酸代謝中大量的靶基因。LXRα高表達(dá)于代謝旺盛的組織如肝臟，且能被脂肪酸所調(diào)節(jié)，這些都指出LXR僅在脂質(zhì)代謝中的作用非常重要。 本實(shí)驗(yàn)以THP-1源性巨噬細(xì)胞為研究對象，研究PPARα激動劑氯貝丁

6、酯(clofibrate)對THP-1源性巨噬細(xì)胞LXRα表達(dá)的影響；并進(jìn)一步研究了氯貝丁酯和PPARγ的激動劑曲格列酮(troglitazone)，對THP-1源性巨噬細(xì)胞中ABCA1表達(dá)及膽固醇流出的影響，從而探討PPARs激動劑在AS防治中的作用機(jī)制。 本研究主要結(jié)果總結(jié)如下： 1．用一次性密度梯度超速離心法從人新鮮血清中分離了高密度脂蛋白(highdensity lipoprotein，HDL)和低密度脂蛋白(l

7、ow density lipoprotein，LDL)。并用二價銅離子誘導(dǎo)LDL氧化，得到氧化型LDL(ox-LDL)，用0.5％瓊脂糖凝膠電泳鑒定HDL、LDL和ox-LDL。 2．人THP-1單核細(xì)胞在使用200nmol/L佛波酯(PMA)作用48小時后誘導(dǎo)生成巨噬細(xì)胞。用PPARα激動劑氯貝丁酯刺激巨噬細(xì)胞不同時間(0，4，8，12和24小時)后，采用RT-PCR法發(fā)現(xiàn)LXRα mRNA水平表達(dá)隨著氯貝丁酯作用時間的延長而

8、具有時間依賴型的表達(dá)增加；采用Western Blot法分析得到巨噬細(xì)胞中LXRα的蛋白質(zhì)表達(dá)也隨著氯貝丁酯作用時間延長而時間依賴型的表達(dá)增加。 3．用PPARα激動劑氯貝丁酯和PPARγ激動劑曲格列酮分別作用巨噬細(xì)胞0，4，8，12和24小時后，采用半定量RT-PCR和Western Blot法得出巨噬細(xì)胞中ABCA1 mRNA水平和蛋白質(zhì)水平表達(dá)均隨著氯貝丁酯或曲格列酮作用時間的延長而表達(dá)增加，且表現(xiàn)為時間依賴型。

9、4．用50mg/L ox-LDL和0.2mCi/L [<'3>H]標(biāo)記的膽固醇負(fù)荷THP-1源性巨噬細(xì)胞24小時后，使之誘導(dǎo)形成泡沫細(xì)胞，采用膽固醇流出實(shí)驗(yàn)檢測氯貝丁酯和曲格列酮刺激泡沫細(xì)胞的膽固醇流出率。證實(shí)在氯貝丁酯和曲格列酮分別作用0，4，8，12和24小時后泡沫細(xì)胞的膽固醇流出均有增加，且都表現(xiàn)為時間依賴型的增加。 實(shí)驗(yàn)證實(shí)PPARα激動劑氯貝丁酯能時間依賴性的上調(diào)LXRα的表達(dá)，同時實(shí)驗(yàn)還證實(shí)PPARα激動劑氯貝丁酯和