tBHQ通過Nrf2-HO-1信號途徑上調THP-1巨噬細胞源性泡沫細胞ABCA1的表達.pdf

1、背景與目的：叔丁基對苯二酚（tBHQ）是一種合成的多酚類抗氧化劑，在體內能激活紅系衍生的核因子相關因子2（Nrf2）。血紅素氧合酶-1（HO-1）是 Nrf2的靶基因，研究顯示Nrf2/HO-1的激活有抗炎抗氧化及防止動脈粥樣硬化(As)發(fā)生的作用。三磷酸腺苷結合盒轉運體A1（ABCA1）是一種重要的膜蛋白轉運體，能介導細胞內膽固醇流出，減少泡沫細胞形成，發(fā)揮抗As的作用。但tBHQ與ABCA1表達之間是否存在聯(lián)系尚不清楚。本研究選取T

2、HP-1巨噬細胞源性泡沫細胞為研究對象，探討tBHQ對ABCA1表達，以及細胞內膽固醇流出的影響，并研究其作用的主要機制。
　　方法：用ox-LDL誘導形成THP-1巨噬細胞源性泡沫細胞，以此細胞模型進行實驗：實時定量PCR和Western blot方法檢測不同濃度tBHQ（0,25,50,100,200μM）處理細胞24 h及tBHQ處理不同時間（0,6,12,24,48 h）后ABCA1的表達情況，高效液相色譜檢測細胞內膽固醇

3、含量，液體閃爍計數(shù)器檢測細胞膽固醇流出；外源性加入calpain處理細胞，觀察tBHQ對細胞內ABCA1蛋白水平的影響，轉染siRNA或加入相應抑制劑抑制Nrf2或HO-1表達，用Western blot方法檢測tBHQ處理24 h后ABCA1等的表達情況，calpain活性試劑盒檢測calpain活性。
　　結果：tBHQ以時間及劑量依賴性上調細胞內 ABCA1蛋白水平及膽固醇流出（P<0.05），但對其mRNA水平無顯著影響。

4、進一步研究發(fā)現(xiàn)tBHQ能劑量依賴性降低calpain的活性（P<0.05），而加入外源性的calpain，ABCA1蛋白水平明顯下降，加入tBHQ則能顯著延緩ABCA1的蛋白降解（P<0.05）。采用HO-1抑制劑或轉染siRNA抑制HO-1表達，tBHQ上調ABCA1蛋白表達及抑制calpain活性的作用隨之取消（P<0.05），加入Nrf2 siRNA也觀察到類似結果，說明Nrf2和HO-1在tBHQ調節(jié)ABCA1蛋白水平中發(fā)揮重要