
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1、目的:了解5-氮雜胞苷誘導(dǎo)培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化過(guò)程中的膜離子通道的改變并探討其機(jī)理。 方法:按文獻(xiàn)方法獲得和培養(yǎng)Sprague-Dawley大鼠骨髓間充質(zhì)(Mesenchymal stem cells,MSCs)干細(xì)胞,培養(yǎng)干細(xì)胞至第2周時(shí)部分骨髓MSCs以10μmol/L5-氮雜胞苷(5-Azacytidine,5-Aza)誘導(dǎo)后再培養(yǎng)4周,以全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)檢測(cè)誘導(dǎo)培養(yǎng)第1、2、3、4周和未誘導(dǎo)培養(yǎng)第6周M
2、SCs的膜電流性質(zhì)以及電流密度的大小。電流檢測(cè)時(shí)各周隨機(jī)封測(cè)30例MSCs,其中10例用含鈉檢測(cè)液檢測(cè)以便于研究細(xì)胞表達(dá)的所有電流種類,20例以無(wú)鈉檢測(cè)液檢測(cè)以便于研究其表達(dá)的K+電流密度的大小。同時(shí)免疫組織化學(xué)分別檢測(cè)誘導(dǎo)與非誘導(dǎo)培養(yǎng)MSCs心肌特異性T型肌鈣蛋白(Cardiac troponin T,cTnT)和縫隙連接蛋白(Gap junction protein43,Cx43)的表達(dá)。 結(jié)果: (1)電流檢測(cè)結(jié)果
3、: ①未誘導(dǎo)和誘導(dǎo)后各周MSCs均檢測(cè)到延遲整流鉀電流(Delayed rectifier K+ current,IkDR)、瞬時(shí)外向鉀電流(Transient outward K+current,Ito)和內(nèi)向整流鉀電流(Inward rectifier K+ current,Ikir)單獨(dú)或復(fù)合存在,表達(dá)不均一,各周三種鉀電流檢出率相近。 ②未誘導(dǎo)培養(yǎng)6周和誘導(dǎo)后第1周MSCs沒(méi)有鈉電流(Sodium current
4、,INa)及鈣電流(Calcium current,ICa)表達(dá),而在誘導(dǎo)第2周開(kāi)始各周均有INa和ICa單獨(dú)或復(fù)合表達(dá)。 ⑧誘導(dǎo)后第1周MSCs三種K+電流強(qiáng)度與未誘導(dǎo)組比較無(wú)明顯差異,而從誘導(dǎo)第2周起開(kāi)始增強(qiáng)(p<0.05),至第4周時(shí)進(jìn)一步增強(qiáng)(p<0.01)。 ④誘導(dǎo)培養(yǎng)組MSCs三種K+電流均隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增強(qiáng)(p<0.05)。 (2)免疫組化檢測(cè)結(jié)果:未誘導(dǎo)培養(yǎng)MSCs的cTnT和Cx43無(wú)表達(dá),
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