肝癌特異性黏附肽的鑒定及其受體蛋白的研究.pdf

1、我國(guó)是肝癌的高發(fā)國(guó)家，每年死于肝癌約11萬(wàn)人，占全世界肝癌死亡人數(shù)的45％。目前主要的治療腫瘤的手段有手術(shù)治療、化學(xué)治療及放射治療等，但它們都存在相當(dāng)?shù)木窒扌院筒豢杀苊獾母弊饔?。近年?lái)興起的腫瘤導(dǎo)向治療，即借助高度特異的親腫瘤物質(zhì)作為載體攜帶藥物對(duì)腫瘤部位進(jìn)行靶向給藥，穩(wěn)定發(fā)揮殺傷作用，成為醫(yī)學(xué)、生物學(xué)領(lǐng)域最熱門的研究課題之一，正逐步的成為腫瘤治療的新途徑。 目前，臨床上主要以單抗作為載體進(jìn)行抗腫瘤治療，取得了豐碩成果。但是這些

2、單抗大多為鼠源性的，進(jìn)入人體后會(huì)引起各種排異反應(yīng)，從而影響攜帶的腫瘤藥物的療效或產(chǎn)生副作用。尋找新的、與正常組織不結(jié)合或很少結(jié)合、但與腫瘤組織特異性結(jié)合的新的非抗體類載體，是優(yōu)化導(dǎo)向治療的策略之一。我們已經(jīng)利用噬菌體肽庫(kù)技術(shù)進(jìn)行了三輪篩選，得到了一些對(duì)肝癌具有靶向性的單克隆噬菌體肽。以肽類作為藥物載體，分子量小，跟目標(biāo)組織具有很強(qiáng)親和能力，在血液及其它非靶組織中清除快，能夠穩(wěn)定滲透和穿入組織細(xì)胞中。于是我們將噬菌體外殼去除掉，僅對(duì)肝癌特

3、異性黏附肽片段進(jìn)行了化學(xué)合成。進(jìn)一步說(shuō)，我們以這些肝癌特異性黏附肽為探針，可以找尋到腫瘤相關(guān)蛋白或者腫瘤標(biāo)志蛋白，研究其受體蛋白的生化特性和結(jié)合機(jī)理，從而優(yōu)化肽類藥物載體，為肝癌發(fā)病機(jī)理的研究以及肝癌的導(dǎo)向治療提供新的藥靶提供科學(xué)依據(jù)。 本論文就是利用免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)方法對(duì)化學(xué)合成的肝癌特異性肽A54進(jìn)行體內(nèi)體外的鑒定；同時(shí)利用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)手段對(duì)該肽與腫瘤細(xì)胞的結(jié)合部位進(jìn)行了精確地定位；通過(guò)生物素-親和素系統(tǒng)進(jìn)行的

4、親和層析篩選肝癌特異性黏附肽的受體蛋白，并利用質(zhì)譜技術(shù)和生物信息學(xué)軟件進(jìn)行鑒定和分析。 從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，肝癌特異性黏附肽A54具有很好的腫瘤靶向性，對(duì)肝組織的結(jié)合能力較弱，結(jié)合熒光素標(biāo)記肽A54的細(xì)胞定位實(shí)驗(yàn)，我們可以判定該肽是與肝腫瘤細(xì)胞膜結(jié)合的，受體蛋白位于腫瘤細(xì)胞膜表面。以肝腫瘤細(xì)胞膜蛋白為庫(kù)，親和篩選出肝癌特異性黏附肽A54的受體蛋白，經(jīng)鑒定分析為熱激蛋白70家族蛋白，用生物信息學(xué)軟件Swiss-modeler進(jìn)行同源模