肝癌特異性黏附肽的鑒定及其受體蛋白的研究.pdf

1、我國是肝癌的高發(fā)國家，每年死于肝癌約11萬人，占全世界肝癌死亡人數(shù)的45％。目前主要的治療腫瘤的手段有手術(shù)治療、化學治療及放射治療等，但它們都存在相當?shù)木窒扌院筒豢杀苊獾母弊饔?。近年來興起的腫瘤導向治療，即借助高度特異的親腫瘤物質(zhì)作為載體攜帶藥物對腫瘤部位進行靶向給藥，穩(wěn)定發(fā)揮殺傷作用，成為醫(yī)學、生物學領(lǐng)域最熱門的研究課題之一，正逐步的成為腫瘤治療的新途徑。 目前，臨床上主要以單抗作為載體進行抗腫瘤治療，取得了豐碩成果。但是這些

2、單抗大多為鼠源性的，進入人體后會引起各種排異反應(yīng)，從而影響攜帶的腫瘤藥物的療效或產(chǎn)生副作用。尋找新的、與正常組織不結(jié)合或很少結(jié)合、但與腫瘤組織特異性結(jié)合的新的非抗體類載體，是優(yōu)化導向治療的策略之一。我們已經(jīng)利用噬菌體肽庫技術(shù)進行了三輪篩選，得到了一些對肝癌具有靶向性的單克隆噬菌體肽。以肽類作為藥物載體，分子量小，跟目標組織具有很強親和能力，在血液及其它非靶組織中清除快，能夠穩(wěn)定滲透和穿入組織細胞中。于是我們將噬菌體外殼去除掉，僅對肝癌特

3、異性黏附肽片段進行了化學合成。進一步說，我們以這些肝癌特異性黏附肽為探針，可以找尋到腫瘤相關(guān)蛋白或者腫瘤標志蛋白，研究其受體蛋白的生化特性和結(jié)合機理，從而優(yōu)化肽類藥物載體，為肝癌發(fā)病機理的研究以及肝癌的導向治療提供新的藥靶提供科學依據(jù)。 本論文就是利用免疫組織化學和免疫細胞化學方法對化學合成的肝癌特異性肽A54進行體內(nèi)體外的鑒定；同時利用免疫熒光細胞化學手段對該肽與腫瘤細胞的結(jié)合部位進行了精確地定位；通過生物素-親和素系統(tǒng)進行的

4、親和層析篩選肝癌特異性黏附肽的受體蛋白，并利用質(zhì)譜技術(shù)和生物信息學軟件進行鑒定和分析。 從實驗結(jié)果來看，肝癌特異性黏附肽A54具有很好的腫瘤靶向性，對肝組織的結(jié)合能力較弱，結(jié)合熒光素標記肽A54的細胞定位實驗，我們可以判定該肽是與肝腫瘤細胞膜結(jié)合的，受體蛋白位于腫瘤細胞膜表面。以肝腫瘤細胞膜蛋白為庫，親和篩選出肝癌特異性黏附肽A54的受體蛋白，經(jīng)鑒定分析為熱激蛋白70家族蛋白，用生物信息學軟件Swiss-modeler進行同源模