晚期糖基化終末產(chǎn)物對軟骨細胞代謝活性的影響.pdf

1、研究目的：
　　1.掌握人胎兒及成人骨性關節(jié)炎患者軟骨細胞的采集以及體外單層培養(yǎng)和三維培養(yǎng)的技術。
　　2.比較單層培養(yǎng)及三維培養(yǎng)的區(qū)別。
　　3.研究AGE-BSA對軟骨細胞代謝的影響。
　　研究方法：
　　1.軟骨細胞的來源：取自26周左右的引產(chǎn)胎兒，酒精消毒雙膝關節(jié)，生理鹽水沖洗后于無菌條件下切取雙膝關節(jié)股骨下端及脛骨平臺表面軟骨，組織剪碎軟骨塊，采用胰蛋白酶及Ⅱ型膠原酶序貫消化法取得單個軟骨細胞，先

2、采用單層培養(yǎng)，然后進行三維培養(yǎng)。成人骨性關節(jié)炎患者軟骨收集來自行膝關節(jié)表面置換患者，術中收集軟骨快后采用相同方法獲得單個軟骨細胞進行培養(yǎng)。
　　2.實驗分組：按照實驗方法分為3組：牛血清白蛋白(BSA)組、AGE-BSA組、sRAGE預處理45min+AGE-BSA組。
　　3.相關檢測指標：倒置光學顯微鏡觀察，軟骨細胞Ⅱ型膠原免疫組化檢測，軟骨細胞HE染色，甲苯胺藍染色，RT-PCR，免疫印跡。
　　研究結(jié)果：

3、>　　1.利用機械與酶序貫消化法成功獲得大量軟骨細胞，成功的進行了體外單層培養(yǎng)及三維培養(yǎng)，構(gòu)建了相對穩(wěn)定的軟骨細胞體外三維培養(yǎng)體系。
　　2.單層培養(yǎng)及三維培養(yǎng)比較后發(fā)現(xiàn)，三維培養(yǎng)在維持軟骨細胞形態(tài)方面優(yōu)于單層培養(yǎng)。
　　3.AGE-BSA可以促進軟骨細胞內(nèi)RAGE、MMP-1的信使RNA合成，抑制其Ⅱ型膠原的合成分泌。
　　結(jié)論：
　　1.利用單層培養(yǎng)可快速獲得大量人胎兒/成人骨性關節(jié)炎患者軟骨細胞，且體外三維