晚期糖基化終末產(chǎn)物對(duì)軟骨細(xì)胞代謝活性的影響.pdf

1、研究目的：
　　1.掌握人胎兒及成人骨性關(guān)節(jié)炎患者軟骨細(xì)胞的采集以及體外單層培養(yǎng)和三維培養(yǎng)的技術(shù)。
　　2.比較單層培養(yǎng)及三維培養(yǎng)的區(qū)別。
　　3.研究AGE-BSA對(duì)軟骨細(xì)胞代謝的影響。
　　研究方法：
　　1.軟骨細(xì)胞的來(lái)源：取自26周左右的引產(chǎn)胎兒，酒精消毒雙膝關(guān)節(jié)，生理鹽水沖洗后于無(wú)菌條件下切取雙膝關(guān)節(jié)股骨下端及脛骨平臺(tái)表面軟骨，組織剪碎軟骨塊，采用胰蛋白酶及Ⅱ型膠原酶序貫消化法取得單個(gè)軟骨細(xì)胞，先

2、采用單層培養(yǎng)，然后進(jìn)行三維培養(yǎng)。成人骨性關(guān)節(jié)炎患者軟骨收集來(lái)自行膝關(guān)節(jié)表面置換患者，術(shù)中收集軟骨快后采用相同方法獲得單個(gè)軟骨細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。
　　2.實(shí)驗(yàn)分組：按照實(shí)驗(yàn)方法分為3組：牛血清白蛋白(BSA)組、AGE-BSA組、sRAGE預(yù)處理45min+AGE-BSA組。
　　3.相關(guān)檢測(cè)指標(biāo)：倒置光學(xué)顯微鏡觀察，軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原免疫組化檢測(cè)，軟骨細(xì)胞HE染色，甲苯胺藍(lán)染色，RT-PCR，免疫印跡。
　　研究結(jié)果：

3、>　　1.利用機(jī)械與酶序貫消化法成功獲得大量軟骨細(xì)胞，成功的進(jìn)行了體外單層培養(yǎng)及三維培養(yǎng)，構(gòu)建了相對(duì)穩(wěn)定的軟骨細(xì)胞體外三維培養(yǎng)體系。
　　2.單層培養(yǎng)及三維培養(yǎng)比較后發(fā)現(xiàn)，三維培養(yǎng)在維持軟骨細(xì)胞形態(tài)方面優(yōu)于單層培養(yǎng)。
　　3.AGE-BSA可以促進(jìn)軟骨細(xì)胞內(nèi)RAGE、MMP-1的信使RNA合成，抑制其Ⅱ型膠原的合成分泌。
　　結(jié)論：
　　1.利用單層培養(yǎng)可快速獲得大量人胎兒/成人骨性關(guān)節(jié)炎患者軟骨細(xì)胞，且體外三維