定點(diǎn)編輯人jmjd3基因的TALEN質(zhì)粒構(gòu)建及jmjd3基因敲除對(duì)人宮頸癌細(xì)胞體外效應(yīng)觀察.pdf

1、目的：
　　利用TALEN技術(shù)構(gòu)建編輯人jmjd3基因的TALEN質(zhì)粒，并觀察Jmjd3敲除后人宮頸癌細(xì)胞體外生長(zhǎng)情況。
　　方法：
　　構(gòu)建編輯人jmjd3基因的TALEN質(zhì)粒載體（TALEN左臂質(zhì)粒L1及TALEN右臂質(zhì)粒R1），經(jīng)酶切鑒定，測(cè)序驗(yàn)證；用TALEN左臂L1、TALEN右臂R1、EGFP熒光質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染人宮頸癌細(xì)胞系Hela，同時(shí)設(shè)未轉(zhuǎn)染的宮頸癌細(xì)胞為空白對(duì)照，轉(zhuǎn)染24小時(shí)后計(jì)算轉(zhuǎn)染效率。隨后采用濃度

2、為2ug/ul嘌呤霉素溶液進(jìn)行篩選至空白對(duì)照組細(xì)胞全部死亡（>3d)，共轉(zhuǎn)染組細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)，行RT-PCR檢測(cè)宮頸癌細(xì)胞內(nèi)jmjd3 mRNA表達(dá)水平，MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖活力。
　　結(jié)果：
　　經(jīng)酶切鑒定，DNA測(cè)序及blast比對(duì)分析證實(shí)成功構(gòu)建編輯人jmjd3基因TALEN質(zhì)粒對(duì)；轉(zhuǎn)染后Hela細(xì)胞與空白對(duì)照組相比，可見(jiàn)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染組jmjd3 mRNA表達(dá)水平明顯降低，表達(dá)抑制率為（46.5±2.0）％；MTT檢測(cè)表明質(zhì)