Rab5a蛋白調(diào)控巨噬細(xì)胞中TLR3-TLR4信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的研究.pdf

1、TLRs是天然免疫應(yīng)答中一類高度保守的模式識別受體。通過識別病原體相關(guān)的分子模式，TLRs活化后促進(jìn)免疫細(xì)胞分泌促炎性細(xì)胞因子和Ⅰ型干擾素，從而清除病原微生物的感染。Rab5a是Rabs家族的一個主要成員，定位于質(zhì)膜、早期內(nèi)體和網(wǎng)格蛋白覆蓋的囊泡。它負(fù)責(zé)調(diào)控早期內(nèi)體與胞吞泡融合，是早期胞吞途徑的一個主要限速成分。有研究發(fā)現(xiàn)，Rab5a不但參與了細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸和蛋白分選，還參與了信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。Rab5a如何調(diào)控TLRs信號轉(zhuǎn)導(dǎo)尚未見報道。目的

2、：研究Rab5a在巨噬細(xì)胞RAW264.7中對 TLR3和TLR4信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的作用。方法：通過脂質(zhì)體法將Rab5a及其突變體Rab5aN133I的真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染到RAW264.7細(xì)胞中，G418選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，建立穩(wěn)定表達(dá)Rab5a和Rab5aN133I的細(xì)胞系。通過RT-PCR和Real-time PCR和Western Blot方法鑒定穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系。MTT法分析其生長特性，LPS和polyI:C刺激巨噬細(xì)胞系不同時間，檢

3、測iNOS、TNF-α和IL-6的表達(dá)水平的變化。結(jié)果：轉(zhuǎn)染Rab5a/Rab5aN133I細(xì)胞Rab5a mRNA水平顯著高于對照（p<0.05）。Rab5a的過表達(dá)促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞增殖，而過表達(dá)Rab5aN133I細(xì)胞增殖顯著慢于對照細(xì)胞（p<0.05）。Rab5a過表達(dá)顯著促進(jìn)了LPS/polyI:C活化的RAW264.7細(xì)胞中iNOS、TNF-α和IL-6的表達(dá)（p<0.01）。而Rab5aN133I過表達(dá)后上述細(xì)胞因子