慢病毒介導(dǎo)mIL12轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞抑制鼠結(jié)腸癌CT26瘤體的生長.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:構(gòu)建慢病毒/mIL12過表達重組體，培育出可長期穩(wěn)定表達mIL12的大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞株(mIL12-BMSCs)，并研究其對大鼠結(jié)腸癌(CT26)模型的影響。
　　方法:設(shè)計并合成引物，PCR擴增并回收純化后的 p40和p35基因片段，行Overlap-ping PC R連接獲得mIL12的單鏈雙亞基表達融合基因，與慢病毒包裝系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染293T細胞，構(gòu)建慢病毒過表達重組體，再轉(zhuǎn)染BMSCs，藥物篩選培育出穩(wěn)轉(zhuǎn)株；小鼠CT

2、26皮下抑制瘤模型造模成功后，每次A組瘤周注射0.2mlmIL12-BMSCs、B組0.2mlPBS液、C組0.2mlBMSCs、D組0.2ml表達IL12的慢病毒液(rLV/IL12)，統(tǒng)計并分析各組瘤體生長情況。
　　結(jié)果:流式細胞儀鑒定第3代大鼠BMSCs表型CD29+、CD34-、CD44+、CD45-；基因測序證實慢病毒/mIL12過表達重組體構(gòu)建成功；ELISA法檢測出穩(wěn)轉(zhuǎn)株細胞可長期穩(wěn)定表達IL12；統(tǒng)計分析得出，觀

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