LMP-1基因慢病毒重組體對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖影響及其表達(dá).pdf

1、目的：LMP-1重組慢病毒載體體外轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs），并檢測(cè)LMP-1基因?qū)MSCs增殖能力的影響和表達(dá)。
　　方法：選擇4周齡SD大鼠六只（不限雌雄），在無(wú)菌條件下提取骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并培養(yǎng)至第三代。設(shè)立空白對(duì)照組、慢病毒載體轉(zhuǎn)染組和重組基因轉(zhuǎn)染組進(jìn)行轉(zhuǎn)染（空白對(duì)照組為未經(jīng)特殊處理只有第三代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，慢病毒載體轉(zhuǎn)染組只在未經(jīng)特殊處理的第三代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中加入PGC-FU-GFP及轉(zhuǎn)染試劑Poly

2、brene，重組基因轉(zhuǎn)染組只在未經(jīng)特殊處理的第三代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中加入PGC-FU-LMP-1-GFP及轉(zhuǎn)染試劑Polybrene）。轉(zhuǎn)染過(guò)48h后，經(jīng)倒置顯微鏡來(lái)觀察細(xì)胞熒光表達(dá)情況；流式檢測(cè)基因重組體轉(zhuǎn)染的效率；WesternBlot檢測(cè)基因轉(zhuǎn)染后的表達(dá)情況；MTT評(píng)估基因重組體轉(zhuǎn)染對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖影響。
　　結(jié)果：1.成功的培養(yǎng)了第三代BMSCs，以100的感染復(fù)數(shù)（MOI）轉(zhuǎn)染，48小時(shí)后免疫熒光顯微鏡下觀察可見(jiàn)大

3、量綠色熒光蛋白表達(dá)，經(jīng)檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率可達(dá)67％；2.不同時(shí)間點(diǎn)慢病毒載體轉(zhuǎn)染組和重組基因轉(zhuǎn)染組，相對(duì)于空白對(duì)照組細(xì)胞增殖無(wú)顯著性差異（第一天：F=1.151，P=0.083；第三天：F=1.122，P=0.092；第五天：F=0.732，P=0.121；第七天：F=0,424，P=0.502）。3.WesternBlot測(cè)得基因重組轉(zhuǎn)染組在72kDa處有特征帶，與LMP-1基因融合蛋白（~50KDa+28KDa＝78KDa）基本吻合。