骨碎補(bǔ)總黃酮對大鼠牙髓干細(xì)胞增殖和成骨分化的作用研究.pdf

1、目的：探討骨碎補(bǔ)總黃酮對大鼠牙髓干細(xì)胞（DPSCs）增殖和成骨分化的影響，并對PI3K/Akt 通路在其中的作用進(jìn)行初步研究。
　　 方法：1、分離培養(yǎng)大鼠DPSCs 并進(jìn)行鑒定：采用組織塊消化法分離獲得大鼠牙髓細(xì)胞，克隆化分離培養(yǎng)大鼠DPSCs，并采用免疫組織化學(xué)方法鑒定其細(xì)胞表型。2、檢測骨碎補(bǔ)總黃酮對大鼠DPSCs 增殖和成骨分化的作用：實(shí)驗(yàn)組用骨碎補(bǔ)總黃酮濃度分別為0.01 g/L、0.05g/L和0.1 g/L的成骨誘

2、導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，對照組不加入骨碎補(bǔ)總黃酮，僅以成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基為細(xì)胞培養(yǎng)體系。分別在誘導(dǎo)培養(yǎng)后第3、5、7和第9天用MTT 法檢測各組細(xì)胞的增殖；培養(yǎng)后第9天檢測各組細(xì)胞堿性磷酸酶（ALP）水平；第21天茜素紅染色法檢測鈣結(jié)節(jié)形成情況。3、檢測PI3K/Akt 通路在骨碎補(bǔ)總黃酮對大鼠DPSCs 增殖及成骨分化作用過程中的活化情況：誘導(dǎo)培養(yǎng)后第9天采用Western Blot 法檢測以上各組細(xì)胞pAkt的表達(dá)。
　　 結(jié)果：1、

3、分離出的大鼠牙髓細(xì)胞體外生長良好，形態(tài)多為成纖維細(xì)胞樣，少量細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則；克隆化分離培養(yǎng)出的DPSCs 增殖較快，呈集落樣生長，細(xì)胞排列緊密，隨著培養(yǎng)時間的延長，細(xì)胞形態(tài)逐漸伸展為長梭型；免疫組化結(jié)果顯示大鼠DPSCs陽性表達(dá)CD44 及CD29，而CD34 呈陰性表達(dá)。2、經(jīng)骨碎補(bǔ)總黃酮濃度分別為0.01 g/L、0.05g/L 及0.1 g/L的誘導(dǎo)培養(yǎng)基作用后，從時間上看，在各檢測時間點(diǎn)，各實(shí)驗(yàn)組OD490與對照組相比均增加（P

4、<0.05），且0.05g/L組較0.01 g/L組的OD490 也增加（P<0.05），但0.1 g/L組較0.05g/L組OD490增加沒有顯著性差異（P﹥0.05）；從濃度上看，各實(shí)驗(yàn)組第5、7、9天較第3天的OD490均增加（P<0.05），且各實(shí)驗(yàn)組OD490 時間依賴性增加也有顯著性（P<0.05）。各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞ALP 活性均高于對照組（P<0.05），且在骨碎補(bǔ)總黃酮濃度為0.01 g/L、0.05g/L 及0.1 g/L