UV輻照致弱的日本血吸蟲尾蚴誘導(dǎo)C57BL-6小鼠皮膚及引流淋巴結(jié)早期免疫應(yīng)答的動態(tài)變化.pdf

1、血吸蟲病至今仍是世界上一種嚴重的危害公眾健康的人獸共患寄生蟲病.我國為日本血吸蟲病流行區(qū)。2003年全國調(diào)查資料顯示，我國共有現(xiàn)癥患者80余萬，受威脅人口達1億。 發(fā)展血吸蟲病疫苗，實現(xiàn)化療“短效”作用及疫苗接種后的“長效”免疫預(yù)防作用相結(jié)合來控制血吸蟲病，是一個值得追尋的目標。 長期以來，在血吸蟲病疫苗發(fā)展研究中，主導(dǎo)的策略思想是試圖模擬宿主自然感染后產(chǎn)生的免疫保護機理設(shè)計疫苗。但這一由感染誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答特征對再感染即

2、或有一定的抗力，也只是非消除性和低水平的，再感染不可避免。相比之下，輻照致弱尾蚴免疫動物模型的確始終能夠產(chǎn)生高水平的保護力，這一模型的存在對我們研究其產(chǎn)生高水平保護力的機理，進而脫離原有循血吸蟲自然感染免疫應(yīng)答機理的視角，開拓新的疫苗發(fā)展策略起到了很好的引導(dǎo)作用。 對終宿主而言，皮膚是血吸蟲入侵的最早位點，也是具有獨特免疫功能且與整體免疫系統(tǒng)密切相關(guān)的組織器官。在輻照致弱尾蚴經(jīng)腹部皮膚免疫小鼠模型中，局部皮膚及引流淋巴結(jié)是最早接

3、觸童蟲抗原的免疫組織器官。對曼氏血吸蟲輻照致弱尾蚴皮膚期效應(yīng)的研究結(jié)果顯示：皮膚及其引流淋巴結(jié)對產(chǎn)生高保護性免疫力具有重要作用。觀察輻照致弱尾蚴免疫早期皮膚及引流淋巴結(jié)的免疫應(yīng)答特征有助于我們進一步認識其產(chǎn)生保護性免疫力的機制所在。 鑒于紫外線(UV)安全、有效、便捷等特點，所以常被選做輻照致弱的照射源。盡管近年來對日本血吸蟲UV輻照致弱尾蚴保護性免疫的相關(guān)研究逐漸增多，但迄今為止，國內(nèi)外對UV輻照致弱的日本血吸蟲免疫早期，宿主

4、的皮膚及引流淋巴結(jié)免疫應(yīng)答特征及其相關(guān)分子機制研究的報道尚不多見，尤其是與正常尾蚴感染的對照組進行動態(tài)比較觀察。 本研究分別建立了日本血吸蟲正常/UV輻照尾蚴經(jīng)耳廓皮膚感染/免疫小鼠模型，通過HE染色觀察感染或免疫后第1、2、4、7、14、21天耳廓炎癥反應(yīng)動態(tài)變化。進而，采用免疫組化方法和Bio-plex液相蛋白芯片系統(tǒng)，從組織、細胞及分子水平觀察CD11c、IL-12p40在皮膚的表達和皮膚及其引流淋巴結(jié)IFN-γ、IL-4

5、、IL-10、IL-12p40分泌水平的變化。同期比較各項觀察指標在兩種方式處理的小鼠中的異同。 本研究獲得如下主要結(jié)果：1、對不同時間點耳廓厚度的測定和HE染色反映的各個時間點耳廓炎癥進行觀察顯示：和感染/免疫前相比，尾蚴鉆皮后，小鼠耳廓厚度均增加，持續(xù)至21天。正常尾蚴感染小鼠的耳廓厚度增加峰值早于UV輻照尾蚴免疫鼠，且維持時間短于UV輻照尾蚴免疫鼠。光鏡下，正常尾蚴感染耳廓第7天炎癥反應(yīng)最強烈。第14、21天，免疫反應(yīng)減輕

6、，耳廓皮膚結(jié)構(gòu)趨于正常。相比之下，UV輻照尾蚴免疫后第一周，炎癥反應(yīng)與正常尾蚴感染相似。第14天炎癥反應(yīng)達到峰值，遠強于同期正常尾蚴感染，真皮內(nèi)大量嗜酸粒細胞浸潤，淋巴細胞、單核巨噬細胞顯著增多。第21天，炎細胞比例成分與第14天相近，僅反應(yīng)程度有所下降。總之，相比正常尾蚴感染鼠，UV輻照尾蚴免疫鼠耳廓炎癥高峰出現(xiàn)遲，但持續(xù)時間久。 2、采用冰凍切片免疫組化技術(shù)觀察正常尾蚴感染和輻照尾蚴免疫后不同時間點小鼠耳廓IL-12、CD1

7、1c表達。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與陰參相比，尾蚴感染/免疫后不同時間點，IL-12、CD11c表達均增高，分別定位于胞漿和胞膜。在同一時間點，早期正常/UV輻照尾蚴處理小鼠耳廓組織IL-12、CD11c的表達并無明顯差異。但至第14天，這兩種因子在UV輻照尾蚴免疫小鼠的表達均高于正常尾蚴感染鼠，并延續(xù)至第21天。由此提示：在感染/免疫早期，機體局部針對正常/UV輻照尾蚴的免疫應(yīng)答即存在差異。 3、應(yīng)用Bio-plex液相蛋白芯片系統(tǒng)，檢測正

8、常/UV輻照尾蚴處理小鼠后不同時間點，耳廓及其引流淋巴結(jié)IFN-γ、IL-4、IL-12p40及IL-10的分泌水平。結(jié)果顯示：相比于正常小鼠，兩種方式處理的小鼠耳廓皮片培養(yǎng)上清中的IL-10僅略有增高，且各時間點間的差異不顯；IL-12除笫2天、第14天輻照組高于正常尾蚴組(P＜0.05)外，其余時間點兩者差別不明顯。至于耳廓引流淋巴結(jié)，正常尾蚴感染組IL-12自第1天起升高后，第2、4、14、21天維持于較高水平；而UV輻照尾蚴免疫

9、組IL-12第1天迅速增高后，第2天大幅降低，第4天又略有升高。在第14天略下降后，第21天又回升。同一時間點，除第1天免疫組高于感染組、第14天感染組高于免疫組外，其余時間兩組IL-12無明顯差異。正常尾蚴感染鼠的IL-4、IL-10、IFN-γ上升快，在第4天均到達峰值，后又迅速下降，且在第4天，IFN-γ的分泌高于IL-4。而UV輻照尾蚴免疫鼠的IL-4、IL-10、IFN-γ水平則隨時間延長逐步增高，第14天達峰值，第21天略有