胰島素對(duì)前列腺癌細(xì)胞的作用及機(jī)制.pdf

1、目的:
　　建立雄激素非依賴前列腺癌細(xì)胞系，觀察胰島素對(duì)三種前列腺癌細(xì)胞系(LNCaP、LNCaP-AI、PC-3)增殖、活力、遷移與侵襲能力的影響，并探討其可能機(jī)制。
　　方法:
　　本研究分為兩部分。(1)去雄激素環(huán)境下連續(xù)培養(yǎng)前列腺癌LNCaP細(xì)胞，建立雄激素非依賴前列腺癌細(xì)胞系LNCaP-AI;(2)胰島素分別刺激LNCaP、LNCaP-AI、PC-3三種細(xì)胞，采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-TimeP

2、CR)、蛋白免疫印跡(WesternBlotting)、免疫細(xì)胞化學(xué)(immunocytochemistry,ICC)法檢測(cè)胰島素受體表達(dá)變化;細(xì)胞計(jì)數(shù)法、四唑鹽法(MTT)、細(xì)胞劃痕試驗(yàn)、細(xì)胞侵襲試驗(yàn)驗(yàn)(Transwell)分別檢測(cè)細(xì)胞接受刺激前后增殖、活力、遷移和侵襲能力的變化;WesternBlotting檢測(cè)細(xì)胞接受刺激前后Ras、ERK1/2、MEK1/2蛋白的表達(dá)變化以觀察MAPK信號(hào)通路的活性變化。
　　結(jié)果:

3、>　　(1)6個(gè)月后成功建立LNCaP-AI細(xì)胞系。該細(xì)胞可在去雄環(huán)境下正常成長(zhǎng)、傳代、凍存及復(fù)蘇，與LNCaP相比，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，雄激素受體表達(dá)升高，胰島素受體表達(dá)無(wú)明顯變化;(2)胰島素刺激可使三種細(xì)胞的胰島素受體在mRNA及蛋白水平表達(dá)均增加;胰島素對(duì)LNCaP細(xì)胞的增殖、活力、遷移及侵襲均有所抑制，對(duì)PC-3細(xì)胞有明顯促進(jìn)作用，而LNCaP-AI細(xì)胞在胰島素刺激前后增殖、活力、遷移及侵襲均無(wú)明顯變化;胰島素可降低LNCaP細(xì)