尿液檢測MALAT-1對前列腺癌早期診斷的作用及MALAT-1沉默對前列腺癌細胞功能影響的研究.pdf

1、[研究目的]
　　 近年研究發(fā)現長鏈非編碼RNA(lncRNA)肺腺癌轉移相關轉錄本-1(MALAT-1)在包括前列腺癌的較多惡性腫瘤中呈表達增高。但MALAT-1與前列腺癌的具體關系還不是很清楚，了解MALAT-1在前列腺癌組織及前列腺癌細胞系中的表達情況，進而探究MALAT-1沉默后會對前列腺癌細胞的功能產生何種影響。另外，由于血清PSA篩查前列腺癌存在許多局限性，如重復穿刺等，尋找到一種特異性更高的前列腺癌診斷標記物尤為重

2、要。所以，有必要去探究一下在尿液中檢測MALAT-1能否成為前列腺癌篩查的新方式。
　　 [研究方法]
　　 通過實時定量PCR檢測MALAT-1在23對前列腺癌組織及其配對的癌旁正常組織、前列腺癌細胞系(C4-2，PC-3，DU-145，LNCaP，22RV1，LNCaP-AI)及正常前列腺上皮細胞系PWR1-E中的表達水平；設計MALAT-1-siRNA，通過定量PCR挑效率高的siRNA來轉染MALAT-1在其中表

3、達高的前列腺癌細胞系，然后通過不同試驗觀察MALAT-1沉默對前列腺癌細胞功能的影響，包括：通過CCK-8比色、克隆形成試驗評價對細胞增殖能力的影響，通過體外的細胞劃痕試驗、transwell侵襲試驗評價其對細胞遷移、侵襲能力的影響，通過流式細胞儀檢測細胞周期及細胞凋亡的變化。
　　 另外，研究納入了150例需要行前列腺穿刺活檢的患者(PSA＞4.0ng/ml)，其中穿刺陽性59例，穿刺陰性91例。收集他們的前列腺按摩(DRE)

4、后尿液離心得到沉渣，由TRIzol抽提尿沉渣總RNA并經WTA擴增獲得cDNA，定量PCR檢測尿液沉渣中MALAT-1、DD3(也叫PCA3)、PSA的表達水平，計算出每個樣本中MALAT-1、DD3以PSA為內參的相對表達量，進而評價MALAT-1的診斷功能。
　　 [結果]
　　 MALAT-1在前列腺癌組織中呈高表達的占78％(18/23)，且在前列腺癌細胞系中的表達明顯高于正常前列腺上皮細胞(P＜0.05)。經M

5、ALAT-1-siRNA轉染的前列腺癌細胞(22RV1，LNCaP-AI)的增殖、遷移、侵襲能力明顯弱于對照組(mock，control)，同時凋亡較對照組明顯增加，細胞周期阻滯于G0/G1。
　　 以尿液中MALAT-1的相對表達水平為指標可以預測前列腺穿刺結果(P=0.0016)，其診斷能力與DD3相當。ROC曲線分析，MALAT-1(AUC=0.643)和DD3(AUC=0.661)，優(yōu)于血清PSA(AUC=0.539)。