紫杉醇對(duì)人宮頸癌細(xì)胞系HCE-,1-影響的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文紫杉醇對(duì)人宮頸癌細(xì)胞系HCE影響的蛋白質(zhì)組學(xué)研究姓名：曹蘭琴申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：林秋華20070501博士學(xué)位論文 中文摘要較對(duì)照組G 2 期細(xì)胞明顯增加，兩者比較差異有顯著性( P < 0 ．0 5 ) 。( 3 )通過(guò)M T F 實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞儀結(jié)果確定紫杉醇( O ．0 5 1 1 t o o l ／L ) 作用宮頸癌H C E l 細(xì)胞2 4 小時(shí)對(duì)癌細(xì)胞增殖抑制作用及G 2 期細(xì)

2、胞影響最大，故選擇O ．0 5 u m o l ／L 紫杉醇干預(yù)H C E l 細(xì)胞2 4 小時(shí)進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析。( 4 ) 蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果如下：①得到了分辨率較高、重復(fù)性較好的處理組和對(duì)照組的雙向凝膠電泳圖譜，處理組和對(duì)照組3 塊凝膠的平均蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)分別為9 1 2 ±1 8 和8 7 9 4 - _ 2 5 ，平均匹配的點(diǎn)數(shù)分別為7 6 9 ±1 7 和7 7 1 ±1 3 ，匹配率達(dá)8 4 ．5 ％

3、和8 7 ．6 ％；處理組與對(duì)照組3 塊不同膠之間蛋白質(zhì)點(diǎn)在等電聚焦( I s o e l e c t r i cf o c u s i n g ，I E F ) 方向的偏差是1 ．3 2 2 _ 4 - 0 ．2 2 8I ／I l T I ，在十二烷基磺酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳( S o d i u m d o d e c y l s u l f a t e - p o l y a c r y l a m i d eg e le l

4、e c t r o p h o r e s i s ，S D S —P A G E )方向上的偏差為1 ．1 4 5 ±0 ．1 3 7 m m 。②比較分析處理組和對(duì)照組的雙向凝膠電泳圖譜，找到差異蛋白質(zhì)點(diǎn)4 2 個(gè)( 差異蛋白點(diǎn)都是2 倍以上差異且在三組中都有相同的差異) ，其中在處理組中表達(dá)上調(diào)的1 3個(gè)，在處理組中表達(dá)下調(diào)的1 7 個(gè)，僅在處理組中表達(dá)的7 個(gè)，僅在對(duì)照組中表達(dá)的5 個(gè)。⑨選擇表達(dá)量差異較明顯的2 1

5、個(gè)蛋白質(zhì)斑點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜分析，共有1 5 個(gè)蛋白得到鑒定，其中8 個(gè)蛋白在處理組表達(dá)上調(diào)，7 個(gè)蛋白在處理組表達(dá)下調(diào)。④使用W e s t e r nb l o t 技術(shù)對(duì)角蛋白8 及a - 烯醇化酶進(jìn)行驗(yàn)證，角蛋白8 及a - 烯醇化酶在處理組表達(dá)下調(diào)，與蛋白質(zhì)組學(xué)的結(jié)果一致。結(jié)論：①紫杉醇對(duì)宮頸癌細(xì)胞H C E l 的增殖具有抑制作用。②低濃度紫杉醇只影響宮頸癌細(xì)胞凋亡率；高濃度紫杉醇既影響宮頸癌細(xì)胞的凋亡率，又能改變細(xì)胞周期。⑨肽基脯