豬Klf4、Klf5、Klf7和Egr2基因的克隆及分子特性研究.pdf

1、KLF家族是真核生物中廣泛存在的一類基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄元件結(jié)合蛋白(BTEP)，通過羧基端三個連續(xù)鋅指構(gòu)成的保守結(jié)構(gòu)域結(jié)合靶基因啟動子內(nèi)富含 GC 序列以調(diào)控其轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而調(diào)控各類細(xì)胞的增殖分化和組織發(fā)育，它們自身表達(dá)失控后將導(dǎo)致細(xì)胞的無限增殖，導(dǎo)致癌癥的發(fā)生。EGR2是真核生物中另一鋅指類基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄因子，在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育調(diào)控中有關(guān)鍵作用。 本研究克隆了豬KLF家族中Klf5、Klf7和Egr2包括完整CDS的mRNA序列；分別擴(kuò)增了豬Klf

2、4、Klf5、Egr2的第3、第2、第1內(nèi)含子并對它們?nèi)旧w定位；通過半定量RT-PCR研究了Klf4、Klf5、Klf7和Egr2在豬十個組織中的相對表達(dá)；還探討了胰島素和克倫特羅對它們在前脂肪細(xì)胞3T3-L1中表達(dá)的影響，得出了如下結(jié)果： 1.克隆1374bp的Klf5全長CDS，該基因編碼457 aa的蛋白質(zhì)產(chǎn)物，與人、大鼠分別有95.8％和89.4％的同源性。 2.克隆1112bp的Klf7 mRNA，包含909

3、bp的全長CDS，編碼302 aa的蛋白質(zhì)產(chǎn)物，與人、大鼠分別有98.3％和97％的同源性。 3.克隆1500bp的Egr2 mRNA，包含1416bp的全長CDS，編碼471 aa的蛋白質(zhì)產(chǎn)物，與入、大鼠分別有91.8％和88.4％的同源性。 4.克隆分別長916bp、1027bp、1342bp的Klf4第3內(nèi)含子、Klf5第2內(nèi)含子和Egr2第1內(nèi)含子。 5.將豬Klf4、Klf5、Egr2分別染色體定位于

4、1q28-29、11q13-14、14q23-25，它們的定位和人相應(yīng)基因染色體定位有對應(yīng)關(guān)系。 6.用半定量RT-PCR技術(shù)確定了Klf4、Klf5、Klf7 和 Egr2 嵋在豬肌肉、脂肪、肺、肝、脾、小腸、腎、胃、大腦和心等中的組織表達(dá)譜。 7.在3T3-L1前脂肪細(xì)胞中，胰島素刺激Klf4的表達(dá)，而抑制朋Klf5和Egr2的表達(dá)；克倫特羅刺激Klf5的表達(dá)，抑制Klf2的表達(dá)，對Klf4婊達(dá)則隨著濃度的升高由刺激