香煙提取物對人內(nèi)皮細(xì)胞MMP-9和TIMP-1分泌的影響.pdf

1、目的:研究香煙提取物(cigerettesmokingextract,CSE)對體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞胞產(chǎn)生基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)及其組織抑制因子(tissueinhibitorofmetalloproteinase-1,TIMP-1)的影響. 方法:體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(ECV-304),取指數(shù)生長期細(xì)胞用于實驗。去過濾嘴燃燒的香煙由負(fù)壓吸引裝置連續(xù)抽吸,吸入

2、煙霧經(jīng)三通另一個出口入PBS液體中制成懸液,過濾除菌,并稀釋成含不同濃度的CSE的DMEM培養(yǎng)基,1h內(nèi)用于實驗。用不同濃度的CSE(0,2.5[％],5[％],10[％])干預(yù)內(nèi)皮細(xì)胞,根據(jù)干預(yù)濃度的不同,將實驗分四組:1、對照組;2、2.5[％]CSE干預(yù)組;3、5[％]CSE干預(yù)組;4、10[％]CSE干預(yù)組。10[％]CSE干預(yù)ECV-304細(xì)胞0h,3h,6h,9h,12h,24h,48h,收集培養(yǎng)上清液,酶聯(lián)免疫吸附測定(E

3、LISA)法檢測上清中MMP-9、TIMP-I的濃度;收集不同CSE濃度干預(yù)24h后的培養(yǎng)細(xì)胞,提取細(xì)胞中的蛋白,Bradford法測定蛋白濃度,WesternBlot法檢測MMP-9、TIMP-1蛋白表達(dá)。 結(jié)果:對照組MMP-9濃度為1.66±0.1ng/ml,2.5[％]CSE干預(yù)組、5[％]CSE干預(yù)組、10[％]CSE干預(yù)組的MMP-9濃度分別為2.79±0.2ng/ml、4.70±0.5ng/ml、7.43±0.6n

4、g/ml。不同濃度CSE干預(yù)組和對照組比較,MMP-9濃度增高,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),各干預(yù)組組間兩兩比較,也具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),MMP-9濃度增高與CSE呈濃度依賴性；10％CSE干預(yù)細(xì)胞0h，3h，6h，9h，12h，24h，48h后，培養(yǎng)上清MMP-9濃度分別為1.70±0.3ng／ml，2.72±0.3ng／ml，3.04±0.2ng／ml，4.12±0.4ng／ml，5.24±0.2ng／ml，7.43±

5、0.6ng／ml，8.23±0.6ng／ml，10％CSE干預(yù)內(nèi)皮細(xì)胞3h后，MMP-9濃度開始升高，隨著時間的延長MMP-9濃度逐漸升高，不同時間點與Oh比較均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.01)。對照組TIMP-1濃度為2.15±0.3ng／ml，2.5％CSE干預(yù)組、-5％CSE干預(yù)組、10％CSE干預(yù)組的TIMP-1濃度分別為5.68±0.5ng／ml、10.31±0.7ng／ml、13.65±0.6ng／ml。不同濃度CSE干預(yù)組

6、和對照組比較，TIMP-1濃度增高，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，各干預(yù)組組間兩兩比較，也具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；10％CSE干預(yù)細(xì)胞0h，3h，6h，9h，12h，24h，48h后，培養(yǎng)上清TIMP-1濃度分別為2.43±0.4ng／ml，3.53±0.5ng／ml，4.73±0.5ng／ml，6.47±0.4ng／ml，9.11±0.5ng／ml，13.65±0.6ng／ml，152±0.9ng／ml，10％CSE干預(yù)內(nèi)皮細(xì)

7、胞3h后，TIMP-1濃度開始升高，隨著時間的延長TIMP-1濃度逐漸升高，不同時間點與Oh比較均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。對照組MMP-9／TIMP-1為0.79±0.06，2.5％CSE干預(yù)組、5％CSE干預(yù)組、10％CSE干預(yù)組MMP-9／TIMP-1分別為0.49±0.02、0.46±0.03、0.55±0.02，各干預(yù)組和對照組比較，MMP-9和TIMP-1的濃度比值降低，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，但各干預(yù)組間比較

8、差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。10％CSE干預(yù)細(xì)胞不同時間后，MMP-9／TIMP-1呈先上升后下降的動態(tài)變化過程。WesternBlot顯示，對照組MMP-9蛋白表達(dá)很少，不同濃度CSE干預(yù)培養(yǎng)細(xì)胞24h后MMP-9蛋白表達(dá)增高，且隨著CSE濃度的增高，MMP-9蛋白表達(dá)也逐漸增高；對照組TIMP-1蛋白有少量表達(dá)，不同濃度CSE干預(yù)培養(yǎng)細(xì)胞24h后TIMP-1蛋白表達(dá)增高，且隨著CSE濃度的增高，TIMP-1蛋白表達(dá)也逐漸增高。