格爾德霉素的抗病毒作用及其相關基因的研究.pdf

1、目的： 格爾德霉素作為一種苯醌安莎霉素類抗生素，是熱休克蛋白90的特異性抑制劑。GA與Hsp90結合可以抑制其伴侶功能的發(fā)揮，促進Hsp90配體蛋白廣泛降解，并改變它們的細胞內轉運。GA即具有抗腫瘤作用，也具有廣譜的抗病毒作用，但其抗病毒作用的機制尚未闡明。本研究在確定GA抗病毒作用的基礎上，采用基因芯片技術來確定GA抗病毒作用的可能相關基因。 方法： 用單純皰疹病毒Ⅰ型（HSV-1）和柯薩奇B組病毒（CBV）感

2、染HeLa細胞，通過噬斑形成實驗測定不同藥物濃度對病毒產(chǎn)量的影響。用G418篩選穩(wěn)定表達SARS冠狀病毒N蛋白的293細胞單克?。?93-N），以正常293細胞為對照，用流式細胞技術分析SARS-N蛋白對細胞周期的作用，以及GA對SARS-N蛋白引起的細胞抑制作用的影響。用基因芯片分析了未處理的HeLa細胞、GA處理的HeLa細胞（1μM，24hr）、HSV-1感染的HeLa細胞（24hr），以及GA處理的HSV-1感染的HeLa細胞（

3、1μM，24hr）這四種細胞轉錄譜的變化，并用半定量RT-PCR對基因芯片結果進行驗證。 結果： GA可以有效地抑制HSV-1和CBV的復制。當GA濃度為0．625μM時，細胞內HSV-1的滴度降低了104，CBV的滴度降低了103。SARS-冠狀病毒N蛋白使細胞出現(xiàn)S-G2期的阻滯，GA還可以抵抗這種細胞周期的阻滯作用，使細胞恢復正常的周期?；蛐酒Y果顯示GA對細胞的轉錄譜有顯著性影響，其中GA上調、HSV-1下調