雞IFIT5基因的克隆、表達(dá)及其抗病毒功能研究.pdf

1、IFIT家族是一類主要受干擾素、病毒和脂多糖誘導(dǎo)表達(dá)的干擾素誘導(dǎo)基因。其編碼的蛋白可通過抑制翻譯起始，識(shí)別、結(jié)合并隱退特定類型的病毒核酸或蛋白以及參與調(diào)節(jié)細(xì)胞固有的和非固有的免疫反應(yīng)等方式來抵抗病毒的入侵。然而，目前該家族基因在禽類上的研究甚少。本研究首先通過分子克隆的方法獲取了雞IFIT5基因CDS區(qū)全長序列，并對(duì)其相關(guān)分子生物信息進(jìn)行了分析與預(yù)測。其次，采用qRT-PCR技術(shù)構(gòu)建了雞IFIT5基因的組織表達(dá)譜，并在機(jī)體和細(xì)胞水平上檢

2、測了雞IFIT5基因?qū)Σ煌玖π鲁且卟《径局旰筒煌T導(dǎo)刺激物的免疫應(yīng)答差異。最后，在細(xì)胞水平上采用siRNA干擾和外源過表達(dá)技術(shù)初步探究了雞MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3對(duì)IFIT5基因的表達(dá)調(diào)控作用以及雞IFIT5基因?qū)RF-3和NF-κB信號(hào)通路的影響。取得的主要結(jié)果如下:
　　(1)雞IFIT5基因CDS區(qū)全序列長1440bp，由兩個(gè)外顯子組成，共可編碼479個(gè)氨基酸。其推導(dǎo)氨基酸序列與鳥類對(duì)應(yīng)序列的相似度均

3、不超過70％，與哺乳動(dòng)物對(duì)應(yīng)序列的相似度均不超過50％。
　　(2)雞IFIT5基因在脾、心、肺、胸腺、腎和小腸組織中具有相對(duì)較高的mRNA表達(dá)豐度，在法氏囊、腦、胸肌和腿肌組織中具有相對(duì)較低的mRNA表達(dá)豐度，而在肝臟組織中幾乎不表達(dá)。
　　(3)雞IFIT5基因在兩攻毒組雞只的胸腺和脾臟組織中的表達(dá)量變化均呈先上升后下降的趨勢且在第二天達(dá)到峰值，在Mukteswar攻毒雞只的法氏囊組織中呈先上升后下降的趨勢且在第一天達(dá)到

4、峰值，在F48E9攻毒雞只的法氏囊組織中則呈持續(xù)上升趨勢。
　　(4)雞IFIT5和IFN-β基因在轉(zhuǎn)染poly I∶C和poly dA∶dT4 h后表達(dá)水平顯著上調(diào)。
　　(5)雞IFIT5和IFN-β基因在感染Mukteswar毒株后存在明顯協(xié)同表達(dá)關(guān)系，且在8h后的二次感染過程中雞IFIT5基因的表達(dá)量相對(duì)于IFN-β基因呈現(xiàn)出明顯的延后上調(diào)。
　　(6)過表達(dá)雞MDA-5、MAVS和IRF-3基因可顯著增強(qiáng)雞I

5、FIT5基因的免疫應(yīng)答水平，而干擾雞MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3基因可顯著抑制雞IFIT5基因的免疫應(yīng)答水平。
　　(7)過表達(dá)雞IFIT5基因可顯著增強(qiáng)IRF-3和NF-κB應(yīng)答基因的免疫應(yīng)答水平。
　　上述結(jié)果表明:雞IFIT5基因在非刺激狀態(tài)下的表達(dá)分布具有明顯的組織特異性，在受到RNA病毒或DNA病毒刺激時(shí)表達(dá)量會(huì)明顯上調(diào)，且其表達(dá)水平會(huì)受到雞MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3蛋白的調(diào)控。此