高多糖的姬松茸和灰樹花品種及其生物活性的研究.pdf

1、收集了全國(guó)26份姬松茸和29份灰樹花菌種，篩選出高多糖的姬松茸和灰樹花品種，并研究其多糖的生物活性，主要結(jié)果如下： 1.通過RAPD、SRAP，ISSR分子標(biāo)記和ITS序列擴(kuò)增對(duì)26份姬松茸菌種(編號(hào)A01～A26)進(jìn)行多態(tài)性分析，綜合四種分子標(biāo)記的結(jié)果，采用類平均法(UPGMA)進(jìn)行聚類分析，姬松茸可分為4類.其中第2類中的2個(gè)菌種間的相異系數(shù)為O；第3類中的3個(gè)菌種間的相異系數(shù)為0；第4類中的3個(gè)菌種間的相異系數(shù)為0；這些菌

2、種是同種異名，為同一個(gè)栽培種。 通過RAPD、SRAP和ISSR的綜合聚類分析，29份灰樹花菌種(編號(hào)G01～G29)可分為8類。其中第3類中的2個(gè)菌種間的相異系數(shù)為0；第8類中的2個(gè)菌種間的相異系數(shù)為0；第8類中的5個(gè)菌種間的相異系數(shù)為0；這些菌種是同種異名，為同一個(gè)栽培種。 2.采用正交法，對(duì)熱水浸提法、超聲輔助熱水浸提法及微波輔助熱水浸提法的姬松茸、灰樹花多糖提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化。姬松茸多糖熱水浸提法的最佳工藝為：p

3、H值7.5，料水比為1：20，提取溫度為100℃，提取時(shí)間為4h，醇沉濃度為100％，多糖提取率為12.17％，多糖含量為64.84％。超聲輔助熱水浸提法的最佳務(wù)件為：超聲功率600W，超聲時(shí)間4min，浸提時(shí)間2h，多糖提取率為13.76％，多糖含量為54.97％，應(yīng)用超聲波可提高姬松茸多糖提取率13.06％，但是多糖含量下降了9.87％。微波輔助熱水浸提法的最佳條件為：中功率，微波時(shí)間4min，水提2h，多糖提取率為14.13％，多

4、糖含量為66.29％，應(yīng)用微波可提高姬松茸多糖提取率16.10％，對(duì)多糖含量沒有顯著影響。 灰樹花多糖熱水浸提法的最佳工藝為：pH值7.5，料水比為1：20，提取溫度為100℃，提取時(shí)間為4h，醇沉濃度為95％，多糖提取率為7.08％，多糖含量為73.49％。超聲輔助熱水浸提法的最佳條件為：超聲功率400W，超聲時(shí)間6min，浸提時(shí)間2h，多糖提取率為8.04％，多糖含量為58.60％，應(yīng)用超聲波可提高灰樹花多糖提取率13.56

5、％，但與熱水浸提法相比，多糖含量下降了14.89％.微波輔助熱水浸提法的最佳條件為：高功率，微波時(shí)間4min，水提2h，多糖提取率為9.17％，多糖含量為70.41％，應(yīng)用微波可提高灰樹花多糖提取率29.52％，對(duì)多糖含量沒有顯著影響。 3.對(duì)4類姬松茸品種和8類灰樹花品種的多糖進(jìn)行提取測(cè)定。篩選出高多糖姬松茸品種“AB01”，其發(fā)酵膠多糖含量達(dá)2.05mg/ml，是應(yīng)用面積最廣品種“N-2”(1.44mg/ml)的1.42倍，

6、是平均值(1.27mg/ml)的1.61倍，是多糖含量最低品種“AB03”(0.61mg/ml)的3.36倍.該品種的深層發(fā)酵產(chǎn)量高，胞內(nèi)多糖含量為12.04％，胞外多糖含量為1.54mg/ml。 篩選出高多糖灰樹花品種“GF06”，其發(fā)酵膠多糖含量達(dá)1.65mg/ml，是應(yīng)用面積最廣品種“52”(0.65mg/ml)的2.53倍，是平均值(0.59mg/ml)的2.79倍，是多糖含量最低品種“GF03”(0.22mg/ml)的

7、7.50倍。該品種胞內(nèi)多糖含量為7.22％，胞外多糖含量為0.98mg/ml。 4.通過構(gòu)建小鼠S180荷瘤模型對(duì)姬松茸和灰樹花及復(fù)合多糖組分進(jìn)行抗腫瘤作用研究.姬松茸組中：“AB01”的發(fā)酵膠多糖(AB01-P)對(duì)小鼠S180腫瘤有極顯著的抑制活性，與劑量呈正相關(guān)，高劑量組的抑瘤率為45.36％，高于“AB03”的發(fā)酵膠多糖(AB03-P)的最佳抑瘤率(25.14％)、“AB01”的胞內(nèi)多糖(AB01-P-1)的最佳抑瘤率(3

8、6.61％)和“AB01”的胞外多糖(AB01-P-2)的最佳抑瘤率(30.05％)。 灰樹花組中：“GF06”的發(fā)酵膠多糖(GF06-P)有極顯著的抑制S180腫瘤活性，與劑量呈正相關(guān)，高劑量組的抑瘤率為42.08％，高于“GF03”的發(fā)酵膠多糖(GF03-P)的最佳抑瘤率(26.78％)、“GF06”的胞內(nèi)多糖(GF06-P-1)的最佳抑瘤率(38.25％)和“GF06”的胞外多糖(GF06-P-2)的最佳抑瘤率(39.89

9、％)。 “AB01”和“GF06”發(fā)酵膠復(fù)合多糖(AG-P)低、中劑量組的抑瘤率呈劑量效應(yīng)，高劑量組的抑瘤率較中劑量組沒有提高，中劑量組的抑瘤率為49.18％。結(jié)果表明復(fù)合多糖組的抑瘤率較單個(gè)菌種多糖給藥組略有提高。 與對(duì)照組相比，姬松茸、灰樹花及復(fù)合多糖各組分均可顯著或極顯著地提高S180荷瘤小鼠的胸腺指數(shù)和脾指數(shù)(免疫指標(biāo))。 5.采用Annexin V/PI雙染色流式細(xì)胞儀研究了高多糖姬松茸品種“AB01”

10、發(fā)酵膠多糖(AB01-P)、高多糖灰樹花品種“GF06”發(fā)酵膠多糖(GF06-P)和復(fù)合多糖(AG—P)對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞株(MG/63)早期凋亡的影響.結(jié)果表明AB01-P可誘導(dǎo)MG/63細(xì)胞凋亡，且具有量效關(guān)系，2.0mg/ml劑量組的凋亡率為30.98％；GF06-P對(duì)MG/63細(xì)胞凋亡沒有明顯作用；AG-P對(duì)MG/63細(xì)胞有一定的凋亡作用，凋亡率為16.35％，不具劑量效應(yīng)。 6.應(yīng)用RT-PCR技術(shù)，研究了AB01-P和G

11、F06-P對(duì)人臍血粒一巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)基因表達(dá)的影響。AB01-P有誘導(dǎo)人臍血單個(gè)核細(xì)胞表達(dá)GM-CSF的作用，最佳濃度為2.0μg/ml，從而證實(shí)了姬松茸多糖促進(jìn)粒一巨噬細(xì)胞生成和調(diào)節(jié)動(dòng)物機(jī)體免疫功能的分子機(jī)理。GF06-P對(duì)人臍血單個(gè)核細(xì)胞GM-CSF基因表達(dá)的誘導(dǎo)作用不明顯。 7.通過果蠅生存試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)果蠅半數(shù)死亡天數(shù)，平均壽命、最高平均壽命；測(cè)定果蠅組織勻漿中的SOD(超氧化物歧化酶)值、MDA(丙二醛

12、)含量和總抗氧化能力值。 姬松茸組中：AB01-P對(duì)果蠅平均壽命的延長(zhǎng)率最高，與對(duì)照組相比，對(duì)雄果蠅壽命的延長(zhǎng)率為17.32％，對(duì)雌果蠅的壽命延長(zhǎng)率為11.40％；對(duì)果蠅半數(shù)死亡的延長(zhǎng)率為1 0.81％(雄)，10.21％(雌)；對(duì)果蠅平均最高壽命的延長(zhǎng)率為15.91％(雄)，13.11％(雌)。 灰樹花組中：GF06-P能顯著延長(zhǎng)雌果蠅的平均壽命，延長(zhǎng)率為為22.00％，對(duì)雄果蠅壽命的延長(zhǎng)率為17.67％；對(duì)果蠅半數(shù)死

13、亡的延長(zhǎng)率為13.31％(雄)，19.71％(雌)；對(duì)果蠅平均最高壽命的延長(zhǎng)率為12.74％(雄)，28.32％(雌)。 復(fù)合多糖AG-P對(duì)雄果蠅的壽命延長(zhǎng)率達(dá)23.78％；對(duì)雌果蠅壽命延長(zhǎng)率為13.06％；顯著延長(zhǎng)雄果蠅平均最高壽命，延長(zhǎng)率為20.77％，對(duì)雌果蠅平均最高壽命的延長(zhǎng)率為19.01％。 AB01-P能極顯著提高雄果蠅的總抗氧化能力，提高率為28.89％，對(duì)雌果蠅沒有影響。AB01-P-2能極顯著提高雄性果

14、蠅的SOD值，提高率為42.77％，對(duì)雌果蠅沒有影響；極顯著提高雄雌果蠅的總抗氧化能力，提高率分別為68.89％、40.54％。GF06-P能顯著提高雄果蠅的總抗氧化能力，提高率為17.78％；極顯著提高雌果蠅的總抗氧化能力，提高率為48.64％。GF06-P-1可以顯著降低雌性果蠅的MDA含量，極顯著降低雄性果蠅的MDA含量；顯著提高雌果蠅的總抗氧化能力，提高率為18.92％。GF06-P-2可以顯著提高雄果蠅的SOD值，提高率為12